CAJ | 학술논문

背景:细胞干燥保存的研究报道较多,组织器官是否适用于干燥保存,尚缺乏证据.目的:用海藻糖作为干燥保护剂,优化海藻糖载入大鼠皮肤的条件,探索皮肤干燥保存的可行性.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-11/2008-11在西北大学生命科学学院组织工程实验室完成.材料:体质量150 g左右成年SD大鼠.海藻糖由Sigma公司提供.方法:通过控制海藻糖浓度(50,300,500,800,1 000 mmol/L)、负载时间(0.5,4,7,9 h)和温度[4℃、4～37℃(相转变)和37℃],优化海藻糖导入大鼠皮肤的条件.将负载海藻糖的皮肤置于含100 g/L二甲基亚砜的DMEM冷冻液中孵育,程序冷冻仪以1℃/min的速率降温至-80℃后移入冷冻干燥机中进行冻干.将冻干皮肤水化复苏后分别用双醋酸羧基荧光素(CFDA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测皮肤活性,并以新鲜和甲醛固定皮肤的吸光度值作为阳性和阴性对照.以苏木精-伊红染色和观察皮肤组织结构,并进行自体移植.主要观察指标:海藻糖在不同加载浓度、孵育温度和时间载入大鼠皮肤的情况.冻干皮肤水化后的形态学、组织学变化及其自体移植后存活情况.结果:海藻糖浓度小于800 mmol/L,皮肤的海藻糖载入量随海藻糖浓度的升高而明显增(P<0.05),浓度大于800 mmol/L,海藻糖载入量差异不显著.孵育温度为37℃组和相转变组皮肤海藻糖载入量明显高于4℃组(P<0.05),相转变组与37℃组差异无统计学意义.皮肤孵育4,7,9 h的海藻糖载入量明显高于孵育0.5 h的载入量(P<0.05),孵育时间为4,7,9 h之间的海藻糖载入量差异不显著,但孵育7 h后皮肤的海藻糖载入量不再增加.实验以海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37℃,孵育时间为7 h为优化的负载条件处理大鼠皮肤.冻干皮肤玻璃化状态良好,呈半透明状.水化后能够恢复到新鲜皮肤的大小和色泽,组织结构和细胞形态与新鲜皮肤组织无差别.冷冻干燥皮肤的活性明显高于甲醛固定的大鼠皮肤(P<0.05).冻干保存的皮肤水化后移植回自体大鼠,可存活长达13 d.结论:海藻糖可作为干燥保护剂进行大鼠皮肤冷冻干燥保存,海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37℃,孵育时间为7 h是海藻糖载入大鼠皮肤的最佳条件. 揹景:細胞榦燥保存的研究報道較多,組織器官是否適用于榦燥保存,尚缺乏證據.目的:用海藻糖作為榦燥保護劑,優化海藻糖載入大鼠皮膚的條件,探索皮膚榦燥保存的可行性.設計、時間及地點:觀察性實驗,于2007-11/2008-11在西北大學生命科學學院組織工程實驗室完成.材料:體質量150 g左右成年SD大鼠.海藻糖由Sigma公司提供.方法:通過控製海藻糖濃度(50,300,500,800,1 000 mmol/L)、負載時間(0.5,4,7,9 h)和溫度[4℃、4～37℃(相轉變)和37℃],優化海藻糖導入大鼠皮膚的條件.將負載海藻糖的皮膚置于含100 g/L二甲基亞砜的DMEM冷凍液中孵育,程序冷凍儀以1℃/min的速率降溫至-80℃後移入冷凍榦燥機中進行凍榦.將凍榦皮膚水化複囌後分彆用雙醋痠羧基熒光素(CFDA)、四甲基偶氮唑鹽(MTT)檢測皮膚活性,併以新鮮和甲醛固定皮膚的吸光度值作為暘性和陰性對照.以囌木精-伊紅染色和觀察皮膚組織結構,併進行自體移植.主要觀察指標:海藻糖在不同加載濃度、孵育溫度和時間載入大鼠皮膚的情況.凍榦皮膚水化後的形態學、組織學變化及其自體移植後存活情況.結果:海藻糖濃度小于800 mmol/L,皮膚的海藻糖載入量隨海藻糖濃度的升高而明顯增(P<0.05),濃度大于800 mmol/L,海藻糖載入量差異不顯著.孵育溫度為37℃組和相轉變組皮膚海藻糖載入量明顯高于4℃組(P<0.05),相轉變組與37℃組差異無統計學意義.皮膚孵育4,7,9 h的海藻糖載入量明顯高于孵育0.5 h的載入量(P<0.05),孵育時間為4,7,9 h之間的海藻糖載入量差異不顯著,但孵育7 h後皮膚的海藻糖載入量不再增加.實驗以海藻糖濃度為800 mmol/L,孵育溫度為37℃,孵育時間為7 h為優化的負載條件處理大鼠皮膚.凍榦皮膚玻璃化狀態良好,呈半透明狀.水化後能夠恢複到新鮮皮膚的大小和色澤,組織結構和細胞形態與新鮮皮膚組織無差彆.冷凍榦燥皮膚的活性明顯高于甲醛固定的大鼠皮膚(P<0.05).凍榦保存的皮膚水化後移植迴自體大鼠,可存活長達13 d.結論:海藻糖可作為榦燥保護劑進行大鼠皮膚冷凍榦燥保存,海藻糖濃度為800 mmol/L,孵育溫度為37℃,孵育時間為7 h是海藻糖載入大鼠皮膚的最佳條件.
배경:세포간조보존적연구보도교다,조직기관시부괄용우간조보존,상결핍증거.목적:용해조당작위간조보호제,우화해조당재입대서피부적조건,탐색피부간조보존적가행성.설계、시간급지점:관찰성실험,우2007-11/2008-11재서북대학생명과학학원조직공정실험실완성.재료:체질량150 g좌우성년SD대서.해조당유Sigma공사제공.방법:통과공제해조당농도(50,300,500,800,1 000 mmol/L)、부재시간(0.5,4,7,9 h)화온도[4℃、4～37℃(상전변)화37℃],우화해조당도입대서피부적조건.장부재해조당적피부치우함100 g/L이갑기아풍적DMEM냉동액중부육,정서냉동의이1℃/min적속솔강온지-80℃후이입냉동간조궤중진행동간.장동간피부수화복소후분별용쌍작산최기형광소(CFDA)、사갑기우담서염(MTT)검측피부활성,병이신선화갑철고정피부적흡광도치작위양성화음성대조.이소목정-이홍염색화관찰피부조직결구,병진행자체이식.주요관찰지표:해조당재불동가재농도、부육온도화시간재입대서피부적정황.동간피부수화후적형태학、조직학변화급기자체이식후존활정황.결과:해조당농도소우800 mmol/L,피부적해조당재입량수해조당농도적승고이명현증(P<0.05),농도대우800 mmol/L,해조당재입량차이불현저.부육온도위37℃조화상전변조피부해조당재입량명현고우4℃조(P<0.05),상전변조여37℃조차이무통계학의의.피부부육4,7,9 h적해조당재입량명현고우부육0.5 h적재입량(P<0.05),부육시간위4,7,9 h지간적해조당재입량차이불현저,단부육7 h후피부적해조당재입량불재증가.실험이해조당농도위800 mmol/L,부육온도위37℃,부육시간위7 h위우화적부재조건처리대서피부.동간피부파리화상태량호,정반투명상.수화후능구회복도신선피부적대소화색택,조직결구화세포형태여신선피부조직무차별.냉동간조피부적활성명현고우갑철고정적대서피부(P<0.05).동간보존적피부수화후이식회자체대서,가존활장체13 d.결론:해조당가작위간조보호제진행대서피부냉동간조보존,해조당농도위800 mmol/L,부육온도위37℃,부육시간위7 h시해조당재입대서피부적최가조건.