石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2009年
6期
722-725
,共4页
火睿%郑勇%田书信%周婷%孙侃%常向云%陈卫刚
火睿%鄭勇%田書信%週婷%孫侃%常嚮雲%陳衛剛
화예%정용%전서신%주정%손간%상향운%진위강
金属蛋白酶组织抑制因子-1%小干扰RNA%肝星状细胞%肝纤维化
金屬蛋白酶組織抑製因子-1%小榦擾RNA%肝星狀細胞%肝纖維化
금속단백매조직억제인자-1%소간우RNA%간성상세포%간섬유화
观察金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)小干扰RNA真核表达载体转染肝星状细胞株HSC-T6后TIMP-1基因表达的情况.构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,利用该载体介导四个特异性和一个非特异性的TIMP-1 shRNA,分别为TIMP-1 shRNA1、TIMP-1shRNA2、TIMP-1shRNA3、TIMP-1shRNA4和TIMP-1 shRNA-NON.采用阳离子脂质体介导法转染HSC-T6细胞,激光共聚焦显微镜观察GFP表达,荧光实时定量PCR方法检测TIMP-1mRNA表达情况.质粒转染HSC-T6细胞后,激光共聚焦显微镜观察转染组细胞内均见绿色荧光,未转染组未见绿色荧光;mRNA水平检测显示:与正常对照组相比,TIMP-1 shRNA1、TIMP-1shRNA2和TIMP-1shRNA4对TIMP-1基因表达较强的抑制作用,尤TIMP-1 shRNA1抑制作用最强(P<0.01).pGCsi-U6介导的TIMP-1shRNA1能更加有效的抑制肝星状细胞中TIMP-1的表达.
觀察金屬蛋白酶組織抑製因子-1(TIMP-1)小榦擾RNA真覈錶達載體轉染肝星狀細胞株HSC-T6後TIMP-1基因錶達的情況.構建攜帶綠色熒光蛋白(GFP)基因的小榦擾RNA真覈錶達載體pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,利用該載體介導四箇特異性和一箇非特異性的TIMP-1 shRNA,分彆為TIMP-1 shRNA1、TIMP-1shRNA2、TIMP-1shRNA3、TIMP-1shRNA4和TIMP-1 shRNA-NON.採用暘離子脂質體介導法轉染HSC-T6細胞,激光共聚焦顯微鏡觀察GFP錶達,熒光實時定量PCR方法檢測TIMP-1mRNA錶達情況.質粒轉染HSC-T6細胞後,激光共聚焦顯微鏡觀察轉染組細胞內均見綠色熒光,未轉染組未見綠色熒光;mRNA水平檢測顯示:與正常對照組相比,TIMP-1 shRNA1、TIMP-1shRNA2和TIMP-1shRNA4對TIMP-1基因錶達較彊的抑製作用,尤TIMP-1 shRNA1抑製作用最彊(P<0.01).pGCsi-U6介導的TIMP-1shRNA1能更加有效的抑製肝星狀細胞中TIMP-1的錶達.
관찰금속단백매조직억제인자-1(TIMP-1)소간우RNA진핵표체재체전염간성상세포주HSC-T6후TIMP-1기인표체적정황.구건휴대록색형광단백(GFP)기인적소간우RNA진핵표체재체pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,이용해재체개도사개특이성화일개비특이성적TIMP-1 shRNA,분별위TIMP-1 shRNA1、TIMP-1shRNA2、TIMP-1shRNA3、TIMP-1shRNA4화TIMP-1 shRNA-NON.채용양리자지질체개도법전염HSC-T6세포,격광공취초현미경관찰GFP표체,형광실시정량PCR방법검측TIMP-1mRNA표체정황.질립전염HSC-T6세포후,격광공취초현미경관찰전염조세포내균견록색형광,미전염조미견록색형광;mRNA수평검측현시:여정상대조조상비,TIMP-1 shRNA1、TIMP-1shRNA2화TIMP-1shRNA4대TIMP-1기인표체교강적억제작용,우TIMP-1 shRNA1억제작용최강(P<0.01).pGCsi-U6개도적TIMP-1shRNA1능경가유효적억제간성상세포중TIMP-1적표체.
