暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2010年
6期
582-587
,共6页
汤渝玲%胡成平%冯俊涛%朱锦琪
湯渝玲%鬍成平%馮俊濤%硃錦琪
탕투령%호성평%풍준도%주금기
神经生长因子%哮喘神经源性炎症%丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路
神經生長因子%哮喘神經源性炎癥%絲裂素活化蛋白激酶信號轉導通路
신경생장인자%효천신경원성염증%사렬소활화단백격매신호전도통로
目的:研究神经生长因子(NGF)介导哮喘神经源性炎症的信号转导通路.方法:选用参与哮喘神经源性炎症的重要效应细胞-支气管气道上皮细胞株(NHBEC)作为研究对象.NHBEC于含体积分数为10%胎牛血清的达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基(DMEM)中培养.实验分8组:①A组:正常对照组;②B组:NGF组;③C组:NGF+丝裂素活化蛋白激酶抑制剂(PD98059)组;④D组:PD98059组;⑤E组:NGF+佛波酯(PMA)组;⑥F组:PMA组;⑦G组:NGF+酪氨酸磷酸化抑制剂(AG490)组;⑧H组:AG490组.分别进行细胞干预.干预后免疫印迹法半定量测定细胞原癌基因(c-fos)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白含量.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量检测各组细胞神经激酶1受体(NK-1R)mRNA含量.并应用免疫细胞化学定性观察各组细胞表达NK-1R的情况.结果:在NGF未处理的PD98059组及AG490组c-fos蛋白水平、磷酸化的ERK1/2蛋白水平几乎检测不到;而在NGF组,经NGF作用30 min后,可见c-fos蛋白水平及磷酸化的ERK1/2蛋白水平显著增高,c-fos/3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)及p-ERK/GAPDH光密度比值分别为(0.835 4±0.101 2)及(1.318 7±0.207 8),与正常对照组相比P<0.01.PD98059可明显抑制NGF诱导NHBEC表达c-fos蛋白及磷酸化的ERK1/2蛋白,c-fos/GAPDH及p-ERK/GAPDH光密度比值分别为(0.301 2±0.103 4)及(0.314 6±0.095 7),与NGF组相比P<0.01.PMA可刺激NGF诱导NHBEC表达c-fos及磷酸化的ERK1/2蛋白.而转录信号转导子与激活子3(Signal transducers and activators of transcription 3, STAT3)传导途径特异性抑制剂AG490则无此作用.免疫细胞化学研究结果显示:正常对照组及PD98059组NK-1R表达呈阴性反应;NGF组及NGF+PMA组呈强阳性反应;PMA组呈阳性反应;而NGF+PD98059组呈弱阳性反应.RT-PCR结果显示:与正常对照组相比,NK-1RmRNA在NGF未处理的PD98059组表达较少;而在NGF组,经NGF作用1h后,可见NK-1RmRNA水平显著增高(光密度比值为1.068 2±0.159 7),与正常对照组(光密度比值为0.375 3±0.064 2)相比P<0.01.PD98059可抑制NGF诱导NHBEC表达NK-1R mRNA(光密度比值为0.478 7±0.098 1).PMA可刺激NGF诱导NHBEC表达NK-1R mRNA.结论:NGF通过上调NHBEC NK-1R的表达,参与哮喘神经源性炎症;NGF上调NHBEC表达NK-1R可能通过激活丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路( Ras/MAPK/c-fos信号传导通路)实现的.
目的:研究神經生長因子(NGF)介導哮喘神經源性炎癥的信號轉導通路.方法:選用參與哮喘神經源性炎癥的重要效應細胞-支氣管氣道上皮細胞株(NHBEC)作為研究對象.NHBEC于含體積分數為10%胎牛血清的達爾伯剋(氏)改良伊格爾(氏)培養基(DMEM)中培養.實驗分8組:①A組:正常對照組;②B組:NGF組;③C組:NGF+絲裂素活化蛋白激酶抑製劑(PD98059)組;④D組:PD98059組;⑤E組:NGF+彿波酯(PMA)組;⑥F組:PMA組;⑦G組:NGF+酪氨痠燐痠化抑製劑(AG490)組;⑧H組:AG490組.分彆進行細胞榦預.榦預後免疫印跡法半定量測定細胞原癌基因(c-fos)、燐痠化胞外信號調節激酶(p-ERK)蛋白含量.逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法半定量檢測各組細胞神經激酶1受體(NK-1R)mRNA含量.併應用免疫細胞化學定性觀察各組細胞錶達NK-1R的情況.結果:在NGF未處理的PD98059組及AG490組c-fos蛋白水平、燐痠化的ERK1/2蛋白水平幾乎檢測不到;而在NGF組,經NGF作用30 min後,可見c-fos蛋白水平及燐痠化的ERK1/2蛋白水平顯著增高,c-fos/3-燐痠甘油醛脫氫酶(GAPDH)及p-ERK/GAPDH光密度比值分彆為(0.835 4±0.101 2)及(1.318 7±0.207 8),與正常對照組相比P<0.01.PD98059可明顯抑製NGF誘導NHBEC錶達c-fos蛋白及燐痠化的ERK1/2蛋白,c-fos/GAPDH及p-ERK/GAPDH光密度比值分彆為(0.301 2±0.103 4)及(0.314 6±0.095 7),與NGF組相比P<0.01.PMA可刺激NGF誘導NHBEC錶達c-fos及燐痠化的ERK1/2蛋白.而轉錄信號轉導子與激活子3(Signal transducers and activators of transcription 3, STAT3)傳導途徑特異性抑製劑AG490則無此作用.免疫細胞化學研究結果顯示:正常對照組及PD98059組NK-1R錶達呈陰性反應;NGF組及NGF+PMA組呈彊暘性反應;PMA組呈暘性反應;而NGF+PD98059組呈弱暘性反應.RT-PCR結果顯示:與正常對照組相比,NK-1RmRNA在NGF未處理的PD98059組錶達較少;而在NGF組,經NGF作用1h後,可見NK-1RmRNA水平顯著增高(光密度比值為1.068 2±0.159 7),與正常對照組(光密度比值為0.375 3±0.064 2)相比P<0.01.PD98059可抑製NGF誘導NHBEC錶達NK-1R mRNA(光密度比值為0.478 7±0.098 1).PMA可刺激NGF誘導NHBEC錶達NK-1R mRNA.結論:NGF通過上調NHBEC NK-1R的錶達,參與哮喘神經源性炎癥;NGF上調NHBEC錶達NK-1R可能通過激活絲裂素活化蛋白激酶信號轉導通路( Ras/MAPK/c-fos信號傳導通路)實現的.
목적:연구신경생장인자(NGF)개도효천신경원성염증적신호전도통로.방법:선용삼여효천신경원성염증적중요효응세포-지기관기도상피세포주(NHBEC)작위연구대상.NHBEC우함체적분수위10%태우혈청적체이백극(씨)개량이격이(씨)배양기(DMEM)중배양.실험분8조:①A조:정상대조조;②B조:NGF조;③C조:NGF+사렬소활화단백격매억제제(PD98059)조;④D조:PD98059조;⑤E조:NGF+불파지(PMA)조;⑥F조:PMA조;⑦G조:NGF+락안산린산화억제제(AG490)조;⑧H조:AG490조.분별진행세포간예.간예후면역인적법반정량측정세포원암기인(c-fos)、린산화포외신호조절격매(p-ERK)단백함량.역전록취합매련반응(RT-PCR)방법반정량검측각조세포신경격매1수체(NK-1R)mRNA함량.병응용면역세포화학정성관찰각조세포표체NK-1R적정황.결과:재NGF미처리적PD98059조급AG490조c-fos단백수평、린산화적ERK1/2단백수평궤호검측불도;이재NGF조,경NGF작용30 min후,가견c-fos단백수평급린산화적ERK1/2단백수평현저증고,c-fos/3-린산감유철탈경매(GAPDH)급p-ERK/GAPDH광밀도비치분별위(0.835 4±0.101 2)급(1.318 7±0.207 8),여정상대조조상비P<0.01.PD98059가명현억제NGF유도NHBEC표체c-fos단백급린산화적ERK1/2단백,c-fos/GAPDH급p-ERK/GAPDH광밀도비치분별위(0.301 2±0.103 4)급(0.314 6±0.095 7),여NGF조상비P<0.01.PMA가자격NGF유도NHBEC표체c-fos급린산화적ERK1/2단백.이전록신호전도자여격활자3(Signal transducers and activators of transcription 3, STAT3)전도도경특이성억제제AG490칙무차작용.면역세포화학연구결과현시:정상대조조급PD98059조NK-1R표체정음성반응;NGF조급NGF+PMA조정강양성반응;PMA조정양성반응;이NGF+PD98059조정약양성반응.RT-PCR결과현시:여정상대조조상비,NK-1RmRNA재NGF미처리적PD98059조표체교소;이재NGF조,경NGF작용1h후,가견NK-1RmRNA수평현저증고(광밀도비치위1.068 2±0.159 7),여정상대조조(광밀도비치위0.375 3±0.064 2)상비P<0.01.PD98059가억제NGF유도NHBEC표체NK-1R mRNA(광밀도비치위0.478 7±0.098 1).PMA가자격NGF유도NHBEC표체NK-1R mRNA.결론:NGF통과상조NHBEC NK-1R적표체,삼여효천신경원성염증;NGF상조NHBEC표체NK-1R가능통과격활사렬소활화단백격매신호전도통로( Ras/MAPK/c-fos신호전도통로)실현적.
