生物加工过程
生物加工過程
생물가공과정
CHINESE JOURNAL OF BIOPROCESS ENGINEERING
2012年
1期
30-36
,共7页
宋炳红%薛智权%钟健%朱启忠%钞亚鹏%钱世钧
宋炳紅%薛智權%鐘健%硃啟忠%鈔亞鵬%錢世鈞
송병홍%설지권%종건%주계충%초아붕%전세균
α-环糊精葡萄糖基转移酶%PQE30%表达及优化
α-環糊精葡萄糖基轉移酶%PQE30%錶達及優化
α-배호정포도당기전이매%PQE30%표체급우화
将来源于Bacillus sp 602 -1的α-环糊精葡萄糖基转移酶(ot-CGT)基因(cgt)插入到表达载体PQE30中,构建重组质粒PQE30/cgt,成功转化宿主菌E coli M15后,得到重组菌株E coli M15 (PQE30/cgt).在IPTG的诱导下得到酶表达的最适条件:TB培养基,0.01 mmol/L IPTG,诱导温度16℃,胞内酶比活力最高可达5 209 U/mL;加入IPTG 24 h后,添加甘氨酸和甘露醇会促使酶向胞外分泌.酶蛋白自诱导表达的适宜条件为在TB培养基中添加乳糖3.0 g/L,葡萄糖1.2 g/L,16℃培养96 h,酶比活力达到8 635 U/mL,明显高于IPTG诱导的效果.通过SDSPAGE验证了上述结论.酶催化转化实验表明:重组酶转化质量分数为1％可溶淀粉24h后,α-环糊精(α-CD)转化率可达38.2％,α和β的峰面积比约为3.4:1,α-CD具有较高的专一性,因此该重组α-CGT酶具有较好的工业化应用前景.
將來源于Bacillus sp 602 -1的α-環糊精葡萄糖基轉移酶(ot-CGT)基因(cgt)插入到錶達載體PQE30中,構建重組質粒PQE30/cgt,成功轉化宿主菌E coli M15後,得到重組菌株E coli M15 (PQE30/cgt).在IPTG的誘導下得到酶錶達的最適條件:TB培養基,0.01 mmol/L IPTG,誘導溫度16℃,胞內酶比活力最高可達5 209 U/mL;加入IPTG 24 h後,添加甘氨痠和甘露醇會促使酶嚮胞外分泌.酶蛋白自誘導錶達的適宜條件為在TB培養基中添加乳糖3.0 g/L,葡萄糖1.2 g/L,16℃培養96 h,酶比活力達到8 635 U/mL,明顯高于IPTG誘導的效果.通過SDSPAGE驗證瞭上述結論.酶催化轉化實驗錶明:重組酶轉化質量分數為1％可溶澱粉24h後,α-環糊精(α-CD)轉化率可達38.2％,α和β的峰麵積比約為3.4:1,α-CD具有較高的專一性,因此該重組α-CGT酶具有較好的工業化應用前景.
장래원우Bacillus sp 602 -1적α-배호정포도당기전이매(ot-CGT)기인(cgt)삽입도표체재체PQE30중,구건중조질립PQE30/cgt,성공전화숙주균E coli M15후,득도중조균주E coli M15 (PQE30/cgt).재IPTG적유도하득도매표체적최괄조건:TB배양기,0.01 mmol/L IPTG,유도온도16℃,포내매비활력최고가체5 209 U/mL;가입IPTG 24 h후,첨가감안산화감로순회촉사매향포외분비.매단백자유도표체적괄의조건위재TB배양기중첨가유당3.0 g/L,포도당1.2 g/L,16℃배양96 h,매비활력체도8 635 U/mL,명현고우IPTG유도적효과.통과SDSPAGE험증료상술결론.매최화전화실험표명:중조매전화질량분수위1％가용정분24h후,α-배호정(α-CD)전화솔가체38.2％,α화β적봉면적비약위3.4:1,α-CD구유교고적전일성,인차해중조α-CGT매구유교호적공업화응용전경.
