人骨髓间充质干细胞生物学特性及腺病毒介导的GFP标记
인골수간충질간세포생물학특성급선병독개도적GFP표기
Biological features of human mesenchymal stem cells and labelling with Ad-GFP transfection
  • 万方数据
    西安交通大学学报（医学版） 서안교통대학학보（의학판）
    JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
    2012年 5期 587-592 ,共6页

    谭云鹤%种铁%杨平%郭子宽%甘为民%陈长虹%翟宇强%石硕文%彭秀君

    담운학%충철%양평%곽자관%감위민%진장홍%적우강%석석문%팽수군

    间充质干细胞%分化%细胞表面标志%Ad-GFP%细胞转染%人淋巴细胞分离液(Ficoll) 間充質榦細胞%分化%細胞錶麵標誌%Ad-GFP%細胞轉染%人淋巴細胞分離液(Ficoll)
    간충질간세포%분화%세포표면표지%Ad-GFP%세포전염%인림파세포분리액(Ficoll)
    目的 建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分离、培养以及鉴定的方法,同时应用腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)检测细胞转染的效率.方法 应用人淋巴细胞分离液(Ficoll)对hMSCs进行分离,经贴壁纯化后用MTT法检测增殖能力;并对其成骨、成脂、成平滑肌诱导分别进行碱性磷酸酶(ALP)、油红O染色及α-SMA免疫细胞化学检测;采用流式细胞仪(FCM)检测细胞表面标志的表达.用Ad-GFP转染,并应用荧光显微镜与FCM检测转染效率.结果 hMSCs镜下为成纤维样形态,约在第4天进入对数增长期;分化诱导后ALP染色、Von kossa银染、油红O染色以及α-SMA均为阳性;FCM检测CD14、CD31、CD45表达阴性,CD44、CD73、CD106及PDGFRβ表达阳性;当感染复数MOI=200,细胞培养48 h时感染效率较高,FCM检测显示为99.81％.结论 经过对增殖、分化能力以及表面标志的分析,证明用Ficoll可以分离得到较纯的hMSCs,Ad-GFP可以很好地感染细胞,为组织工程种子细胞的体内示踪提供了途径.
    목적 건립인골수간충질간세포(hMSCs)분리、배양이급감정적방법,동시응용선병독개도적록색형광단백(Ad-GFP)검측세포전염적효솔.방법 응용인림파세포분리액(Ficoll)대hMSCs진행분리,경첩벽순화후용MTT법검측증식능력;병대기성골、성지、성평활기유도분별진행감성린산매(ALP)、유홍O염색급α-SMA면역세포화학검측;채용류식세포의(FCM)검측세포표면표지적표체.용Ad-GFP전염,병응용형광현미경여FCM검측전염효솔.결과 hMSCs경하위성섬유양형태,약재제4천진입대수증장기;분화유도후ALP염색、Von kossa은염、유홍O염색이급α-SMA균위양성;FCM검측CD14、CD31、CD45표체음성,CD44、CD73、CD106급PDGFRβ표체양성;당감염복수MOI=200,세포배양48 h시감염효솔교고,FCM검측현시위99.81％.결론 경과대증식、분화능력이급표면표지적분석,증명용Ficoll가이분리득도교순적hMSCs,Ad-GFP가이흔호지감염세포,위조직공정충자세포적체내시종제공료도경.
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