中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2005年
10期
1068-1071
,共4页
屈晨雪%李传保%王建中%武淑兰%万文徽
屈晨雪%李傳保%王建中%武淑蘭%萬文徽
굴신설%리전보%왕건중%무숙란%만문휘
血小板%糖蛋白Ⅵ%多克隆抗体
血小闆%糖蛋白Ⅵ%多剋隆抗體
혈소판%당단백Ⅵ%다극륭항체
目的探讨在原核细胞中表达人血小板膜糖蛋白Ⅵ(GPVI)胞外区片段,制备其多克隆抗体.方法采用PCR技术扩增人血小板GPVI胞外区片段123 aa～268 aa的基因序列,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达.表达产物经亲和层析法纯化及鉴定后,免疫家兔制备多克隆抗体.采用已知单克隆抗体进行ELISA双抗夹心法、Western blot和流式细胞术鉴定其特异性.结果构建的重组质粒经酶切和测序证实序列正确.经诱导表达在相对分子量为4 200处有一条明显融合蛋白条带,Western blot分析证实与预期值一致.所得的抗血清效价为1∶ 128,ELISA双抗夹心法检测表明,所制抗体识别血小板GPVI分子.Western blot和流式细胞术检测结果显示所制抗体可与血小板裂解液中及血小板膜表面GPVI分子发生特异性免疫反应.结论利用原核细胞表达的人血小板GPVI分子胞外区片段能有效地诱发动物产生多克隆抗体,所得抗体与人血小板上GPVI分子特异性结合,为深入研究GPVI分子提供了工具.
目的探討在原覈細胞中錶達人血小闆膜糖蛋白Ⅵ(GPVI)胞外區片段,製備其多剋隆抗體.方法採用PCR技術擴增人血小闆GPVI胞外區片段123 aa～268 aa的基因序列,構建其原覈錶達載體,在大腸桿菌中誘導融閤蛋白錶達.錶達產物經親和層析法純化及鑒定後,免疫傢兔製備多剋隆抗體.採用已知單剋隆抗體進行ELISA雙抗夾心法、Western blot和流式細胞術鑒定其特異性.結果構建的重組質粒經酶切和測序證實序列正確.經誘導錶達在相對分子量為4 200處有一條明顯融閤蛋白條帶,Western blot分析證實與預期值一緻.所得的抗血清效價為1∶ 128,ELISA雙抗夾心法檢測錶明,所製抗體識彆血小闆GPVI分子.Western blot和流式細胞術檢測結果顯示所製抗體可與血小闆裂解液中及血小闆膜錶麵GPVI分子髮生特異性免疫反應.結論利用原覈細胞錶達的人血小闆GPVI分子胞外區片段能有效地誘髮動物產生多剋隆抗體,所得抗體與人血小闆上GPVI分子特異性結閤,為深入研究GPVI分子提供瞭工具.
목적탐토재원핵세포중표체인혈소판막당단백Ⅵ(GPVI)포외구편단,제비기다극륭항체.방법채용PCR기술확증인혈소판GPVI포외구편단123 aa～268 aa적기인서렬,구건기원핵표체재체,재대장간균중유도융합단백표체.표체산물경친화층석법순화급감정후,면역가토제비다극륭항체.채용이지단극륭항체진행ELISA쌍항협심법、Western blot화류식세포술감정기특이성.결과구건적중조질립경매절화측서증실서렬정학.경유도표체재상대분자량위4 200처유일조명현융합단백조대,Western blot분석증실여예기치일치.소득적항혈청효개위1∶ 128,ELISA쌍항협심법검측표명,소제항체식별혈소판GPVI분자.Western blot화류식세포술검측결과현시소제항체가여혈소판렬해액중급혈소판막표면GPVI분자발생특이성면역반응.결론이용원핵세포표체적인혈소판GPVI분자포외구편단능유효지유발동물산생다극륭항체,소득항체여인혈소판상GPVI분자특이성결합,위심입연구GPVI분자제공료공구.
