赣南医学院学报
贛南醫學院學報
공남의학원학보
JOURNAL OF GANNAN MEDICAL COLLEGE
2005年
5期
589-592
,共4页
泛素--核糖体蛋白S27a%基因的克隆%基因测序%GST融合表达%蛋白纯化
汎素--覈糖體蛋白S27a%基因的剋隆%基因測序%GST融閤錶達%蛋白純化
범소--핵당체단백S27a%기인적극륭%기인측서%GST융합표체%단백순화
目的:克隆泛素-核糖体蛋白S27a基因并在大肠杆菌细胞内高效表达,并纯化该蛋白.方法:从HL-60细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得泛素/核糖体蛋白S27a的编码区cDNA,将Hind Ⅲ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样双酶切的GST融合表达载体pGEXGST构建为融合表达质粒pGEXGST-S27a,转化感受态的大肠杆菌JM109实现质粒的扩增与纯化,经DNA测序确证后再转化感受态表达菌BL21,表达并纯化出融合蛋白.结果: (1) PCR 扩增获得长约560bp 的泛素-核糖体蛋白S27a 基因片段.(2) SDS - PAGE 证明, 泛素-核糖体蛋白S27a-GST融合蛋白的分子量为43kDa.(3)通过过柱法纯化出泛素-核糖体蛋白S27a-GST融合蛋白.结论:成功克隆出泛素-核糖体蛋白S27a的基因,并在表达菌BL21中可见GST融合表达,并纯化出该融合蛋白,为进一步研究其功能获得了候选蛋白分子.
目的:剋隆汎素-覈糖體蛋白S27a基因併在大腸桿菌細胞內高效錶達,併純化該蛋白.方法:從HL-60細胞中提取總RNA,通過RT-PCR擴增穫得汎素/覈糖體蛋白S27a的編碼區cDNA,將Hind Ⅲ/NdeⅠ雙酶切的PCR產物連接到同樣雙酶切的GST融閤錶達載體pGEXGST構建為融閤錶達質粒pGEXGST-S27a,轉化感受態的大腸桿菌JM109實現質粒的擴增與純化,經DNA測序確證後再轉化感受態錶達菌BL21,錶達併純化齣融閤蛋白.結果: (1) PCR 擴增穫得長約560bp 的汎素-覈糖體蛋白S27a 基因片段.(2) SDS - PAGE 證明, 汎素-覈糖體蛋白S27a-GST融閤蛋白的分子量為43kDa.(3)通過過柱法純化齣汎素-覈糖體蛋白S27a-GST融閤蛋白.結論:成功剋隆齣汎素-覈糖體蛋白S27a的基因,併在錶達菌BL21中可見GST融閤錶達,併純化齣該融閤蛋白,為進一步研究其功能穫得瞭候選蛋白分子.
목적:극륭범소-핵당체단백S27a기인병재대장간균세포내고효표체,병순화해단백.방법:종HL-60세포중제취총RNA,통과RT-PCR확증획득범소/핵당체단백S27a적편마구cDNA,장Hind Ⅲ/NdeⅠ쌍매절적PCR산물련접도동양쌍매절적GST융합표체재체pGEXGST구건위융합표체질립pGEXGST-S27a,전화감수태적대장간균JM109실현질립적확증여순화,경DNA측서학증후재전화감수태표체균BL21,표체병순화출융합단백.결과: (1) PCR 확증획득장약560bp 적범소-핵당체단백S27a 기인편단.(2) SDS - PAGE 증명, 범소-핵당체단백S27a-GST융합단백적분자량위43kDa.(3)통과과주법순화출범소-핵당체단백S27a-GST융합단백.결론:성공극륭출범소-핵당체단백S27a적기인,병재표체균BL21중가견GST융합표체,병순화출해융합단백,위진일보연구기공능획득료후선단백분자.
