CAJ | 학술논문

目的:制备鼠抗人程序性细胞死亡分子10(programmed cell death 10, PDCD10)的单克隆抗体,探讨PDCD10蛋白的结构和功能.方法:利用重组PDCD10蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合, 通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗PDCD10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫荧光实验等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了3株稳定分泌抗PDCD10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5G1, 4F7和3H5.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1(4F7和5G1)和IgG2b(3H5).ELISA检测的单克隆抗体腹水效价可达1:107.3株单克隆抗体与重组PDCD10蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌细胞裂解液以及谷胱苷肽-S转移酶(glutathione S-transferase,GST)没有交叉反应.同时,5G1单克隆抗体也能特异性地结合真核细胞内源性和超表达的PDCD10蛋白,免疫荧光竞争结合实验以及Western blot的结果证明3株PDCD10的单克隆抗体能够识别不同的抗原表位,内源性以及超表达的PDCD10蛋白主要定位在细胞核.结论:获得了效价高、特异性好的PDCD10蛋白的单克隆抗体,为PDCD10的生物学功能研究奠定了基础.
목적:제비서항인정서성세포사망분자10(programmed cell death 10, PDCD10)적단극륭항체,탐토PDCD10단백적결구화공능.방법:이용중조PDCD10단백위면역원,면역BALB/C소서,취면역소서적비세포화동계소서적골수류세포Sp2/0진행상규융합, 통과간접ELISA적사선화유한희석극륭화,획득서항PDCD10단백단극륭항체적잡교류세포주,통과ELISA,Western blot화면역형광실험등방법대기특성진행감정.결과:성공지건립료3주은정분비항PDCD10단백적단극륭항체잡교류세포주,분별명명위5G1, 4F7화3H5.3주단극륭항체적면역구단백아류분별위IgG1(4F7화5G1)화IgG2b(3H5).ELISA검측적단극륭항체복수효개가체1:107.3주단극륭항체여중조PDCD10단백유교강적특이성반응,이여대장간균세포렬해액이급곡광감태-S전이매(glutathione S-transferase,GST)몰유교차반응.동시,5G1단극륭항체야능특이성지결합진핵세포내원성화초표체적PDCD10단백,면역형광경쟁결합실험이급Western blot적결과증명3주PDCD10적단극륭항체능구식별불동적항원표위,내원성이급초표체적PDCD10단백주요정위재세포핵.결론:획득료효개고、특이성호적PDCD10단백적단극륭항체,위PDCD10적생물학공능연구전정료기출.