福建医科大学学报
福建醫科大學學報
복건의과대학학보
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY
2007年
2期
101-104
,共4页
李丽%陈凌%柯丹如%刘志春%江一平
李麗%陳凌%柯丹如%劉誌春%江一平
리려%진릉%가단여%류지춘%강일평
基因%细菌噬菌体P1%发光蛋白质类%重组酶类%克隆,分子
基因%細菌噬菌體P1%髮光蛋白質類%重組酶類%剋隆,分子
기인%세균서균체P1%발광단백질류%중조매류%극륭,분자
目的 构建噬菌体P1 Cre重组酶真核表达重组质粒,检测其在体外的表达情况和生物学活性.方法 利用分子克隆技术,将cre编码序列克隆到真核表达质粒pIRES2-EGFP上,构建为重组质粒pCMV-Cre-EGFP.行菌液PCR、BamHⅠ酶切及测序鉴定,用FuGENE 6介导转染293T细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪观察分析Cre重组酶的表达和重组效应.结果 经菌液PCR、酶切及测序等鉴定分析,证实已将目的片段cre插入pIRES2-EGFP的多克隆位点上;建立Cre(+)组(pCMV-Cre-EGFP和含Loxp-CMV-RFP-Loxp的pCSilencer质粒)和Cre(-)组(pIRES2-EGFP和pCSilencer),转染293T细胞,48 h后荧光显微镜下可见2组均表达绿色荧光和红色荧光,Cre(+)组的红色荧光少于Cre(-)组;流式细胞仪检测荧光蛋白表达率,统计学分析显示2组细胞的红色荧光蛋白表达率存在显著性差异(P＜0.01).结论 成功构建噬菌体P1Cre重组酶表达重组质粒,并能在体外表达具有活性的Cre重组酶.
目的 構建噬菌體P1 Cre重組酶真覈錶達重組質粒,檢測其在體外的錶達情況和生物學活性.方法 利用分子剋隆技術,將cre編碼序列剋隆到真覈錶達質粒pIRES2-EGFP上,構建為重組質粒pCMV-Cre-EGFP.行菌液PCR、BamHⅠ酶切及測序鑒定,用FuGENE 6介導轉染293T細胞,應用熒光顯微鏡和流式細胞儀觀察分析Cre重組酶的錶達和重組效應.結果 經菌液PCR、酶切及測序等鑒定分析,證實已將目的片段cre插入pIRES2-EGFP的多剋隆位點上;建立Cre(+)組(pCMV-Cre-EGFP和含Loxp-CMV-RFP-Loxp的pCSilencer質粒)和Cre(-)組(pIRES2-EGFP和pCSilencer),轉染293T細胞,48 h後熒光顯微鏡下可見2組均錶達綠色熒光和紅色熒光,Cre(+)組的紅色熒光少于Cre(-)組;流式細胞儀檢測熒光蛋白錶達率,統計學分析顯示2組細胞的紅色熒光蛋白錶達率存在顯著性差異(P＜0.01).結論 成功構建噬菌體P1Cre重組酶錶達重組質粒,併能在體外錶達具有活性的Cre重組酶.
목적 구건서균체P1 Cre중조매진핵표체중조질립,검측기재체외적표체정황화생물학활성.방법 이용분자극륭기술,장cre편마서렬극륭도진핵표체질립pIRES2-EGFP상,구건위중조질립pCMV-Cre-EGFP.행균액PCR、BamHⅠ매절급측서감정,용FuGENE 6개도전염293T세포,응용형광현미경화류식세포의관찰분석Cre중조매적표체화중조효응.결과 경균액PCR、매절급측서등감정분석,증실이장목적편단cre삽입pIRES2-EGFP적다극륭위점상;건립Cre(+)조(pCMV-Cre-EGFP화함Loxp-CMV-RFP-Loxp적pCSilencer질립)화Cre(-)조(pIRES2-EGFP화pCSilencer),전염293T세포,48 h후형광현미경하가견2조균표체록색형광화홍색형광,Cre(+)조적홍색형광소우Cre(-)조;류식세포의검측형광단백표체솔,통계학분석현시2조세포적홍색형광단백표체솔존재현저성차이(P＜0.01).결론 성공구건서균체P1Cre중조매표체중조질립,병능재체외표체구유활성적Cre중조매.
