中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2008年
12期
2428-2432
,共5页
低氧%肌成纤维细胞%胶原Ⅰ型%ERK1/2通路
低氧%肌成纖維細胞%膠原Ⅰ型%ERK1/2通路
저양%기성섬유세포%효원Ⅰ형%ERK1/2통로
目的:探讨低氧能否激活成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,以及低氧环境对肾皮质肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响及其可能的信号通路.方法:(1)采用正常大鼠肾成纤维细胞系(NRK-49F),应用Western blotting方法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达;比较低氧和正常氧条件下α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平.(2)原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,Western blotting方法检测低氧和正常氧条件下,HIF-1α和Ⅰ型胶原蛋白水平以及ERK1/2的活化及其特异阻断剂PD98059的阻断效应;RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达水平;细胞免疫化学法检测HIF-1α胞内表达部位的变化;明胶酶谱法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性.结果:(1)低氧刺激6 h,NRK-49F细胞和肌成纤维细胞胞内和核内均有HIF-1α蛋白表达,核内更明显.(2)低氧培养12 h,NRK-49F细胞表达α-SMA蛋白明显增高,是正常氧组的187%±32%(P<0.05),验证了低氧可引起成纤维细胞表型转化.(3)低氧刺激原代培养的正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞6 h、12 h上清中Ⅰ型胶原蛋白水平增加,分别为正常氧组的171%±27%(P<0.05)和256%±61%(P<0.05);低氧刺激4 h、6 h,Ⅰ型胶原mRNA表达增加,为正常氧组的189%±28%(P<0.05)和221%±44%(P<0.05).(4)低氧刺激肌成纤维细胞6 h、12 h、24 h,培养上清液中MMP-9、MMP-2活性无明显变化.(5)低氧刺激肌成纤维细胞15 min即可使ERK1/2活化,阻断实验显示,PD98059可以使低氧12h引起Ⅰ型胶原增加(低氧刺激组为正常氧对照组的273%±51%,P<0.05)显著减少(PD98059+低氧组为正常氧组的108%±19%,P>0.05).结论:低氧促肾纤维化可能与其诱导肾成纤维细胞转化为肌成纤维细胞并经ERK1/2途径增加Ⅰ型胶原蛋白的表达有关.
目的:探討低氧能否激活成纖維細胞轉化為肌成纖維細胞,以及低氧環境對腎皮質肌成纖維細胞錶達Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)的影響及其可能的信號通路.方法:(1)採用正常大鼠腎成纖維細胞繫(NRK-49F),應用Western blotting方法檢測低氧誘導因子-1α(HIF-1α)的錶達;比較低氧和正常氧條件下α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的蛋白水平.(2)原代培養正常大鼠腎皮質肌成纖維細胞,Western blotting方法檢測低氧和正常氧條件下,HIF-1α和Ⅰ型膠原蛋白水平以及ERK1/2的活化及其特異阻斷劑PD98059的阻斷效應;RT-PCR方法檢測Ⅰ型膠原mRNA錶達水平;細胞免疫化學法檢測HIF-1α胞內錶達部位的變化;明膠酶譜法檢測細胞上清中基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)和基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)的活性.結果:(1)低氧刺激6 h,NRK-49F細胞和肌成纖維細胞胞內和覈內均有HIF-1α蛋白錶達,覈內更明顯.(2)低氧培養12 h,NRK-49F細胞錶達α-SMA蛋白明顯增高,是正常氧組的187%±32%(P<0.05),驗證瞭低氧可引起成纖維細胞錶型轉化.(3)低氧刺激原代培養的正常大鼠腎皮質肌成纖維細胞6 h、12 h上清中Ⅰ型膠原蛋白水平增加,分彆為正常氧組的171%±27%(P<0.05)和256%±61%(P<0.05);低氧刺激4 h、6 h,Ⅰ型膠原mRNA錶達增加,為正常氧組的189%±28%(P<0.05)和221%±44%(P<0.05).(4)低氧刺激肌成纖維細胞6 h、12 h、24 h,培養上清液中MMP-9、MMP-2活性無明顯變化.(5)低氧刺激肌成纖維細胞15 min即可使ERK1/2活化,阻斷實驗顯示,PD98059可以使低氧12h引起Ⅰ型膠原增加(低氧刺激組為正常氧對照組的273%±51%,P<0.05)顯著減少(PD98059+低氧組為正常氧組的108%±19%,P>0.05).結論:低氧促腎纖維化可能與其誘導腎成纖維細胞轉化為肌成纖維細胞併經ERK1/2途徑增加Ⅰ型膠原蛋白的錶達有關.
목적:탐토저양능부격활성섬유세포전화위기성섬유세포,이급저양배경대신피질기성섬유세포표체Ⅰ형효원(Col-Ⅰ)적영향급기가능적신호통로.방법:(1)채용정상대서신성섬유세포계(NRK-49F),응용Western blotting방법검측저양유도인자-1α(HIF-1α)적표체;비교저양화정상양조건하α-평활기기동단백(α-SMA)적단백수평.(2)원대배양정상대서신피질기성섬유세포,Western blotting방법검측저양화정상양조건하,HIF-1α화Ⅰ형효원단백수평이급ERK1/2적활화급기특이조단제PD98059적조단효응;RT-PCR방법검측Ⅰ형효원mRNA표체수평;세포면역화학법검측HIF-1α포내표체부위적변화;명효매보법검측세포상청중기질금속단백매-2(MMP-2)화기질금속단백매-9(MMP-9)적활성.결과:(1)저양자격6 h,NRK-49F세포화기성섬유세포포내화핵내균유HIF-1α단백표체,핵내경명현.(2)저양배양12 h,NRK-49F세포표체α-SMA단백명현증고,시정상양조적187%±32%(P<0.05),험증료저양가인기성섬유세포표형전화.(3)저양자격원대배양적정상대서신피질기성섬유세포6 h、12 h상청중Ⅰ형효원단백수평증가,분별위정상양조적171%±27%(P<0.05)화256%±61%(P<0.05);저양자격4 h、6 h,Ⅰ형효원mRNA표체증가,위정상양조적189%±28%(P<0.05)화221%±44%(P<0.05).(4)저양자격기성섬유세포6 h、12 h、24 h,배양상청액중MMP-9、MMP-2활성무명현변화.(5)저양자격기성섬유세포15 min즉가사ERK1/2활화,조단실험현시,PD98059가이사저양12h인기Ⅰ형효원증가(저양자격조위정상양대조조적273%±51%,P<0.05)현저감소(PD98059+저양조위정상양조적108%±19%,P>0.05).결론:저양촉신섬유화가능여기유도신성섬유세포전화위기성섬유세포병경ERK1/2도경증가Ⅰ형효원단백적표체유관.
