西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2008年
6期
148-152,183
,共6页
刘泽发%孙小武%罗伏青%张龑%寇明明%董亚静
劉澤髮%孫小武%囉伏青%張龑%寇明明%董亞靜
류택발%손소무%라복청%장엄%구명명%동아정
南瓜%SRAP%反应体系
南瓜%SRAP%反應體繫
남과%SRAP%반응체계
利用L45正交设计对影响南瓜SRAP反应体系的MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度及模板DNA浓度等5个因素进行了筛选,快速得到稳定性和重复性好的南瓜SRAP扩增体系.对复性温度、PCR循环次数等影响南瓜SRAP扩增结果的重要因素进行了优化.最终优化的南瓜SRAP反应体系为25 μL反应液中:10×buffer2.5 μL, 0.2 mmol/L dNTPs, 引物0.2 μmol/L,1.5 mmol/LMgCl2, DNA模板6 ng/μL, Taq酶1.5 U.本研究最终确立的PCR反应程序为: 94℃预变性5 min, 94℃变性40 s,35℃退火40 s,72℃延伸90 s,进行5个循环,94℃变性40 s,50℃退火40 s,72℃延伸90 s,进行32个循环,最后72℃延伸5 min.在此条件下得到的SRAP标记可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供稳定有效的手段.
利用L45正交設計對影響南瓜SRAP反應體繫的MgCl2濃度、dNTPs濃度、Taq酶含量、引物濃度及模闆DNA濃度等5箇因素進行瞭篩選,快速得到穩定性和重複性好的南瓜SRAP擴增體繫.對複性溫度、PCR循環次數等影響南瓜SRAP擴增結果的重要因素進行瞭優化.最終優化的南瓜SRAP反應體繫為25 μL反應液中:10×buffer2.5 μL, 0.2 mmol/L dNTPs, 引物0.2 μmol/L,1.5 mmol/LMgCl2, DNA模闆6 ng/μL, Taq酶1.5 U.本研究最終確立的PCR反應程序為: 94℃預變性5 min, 94℃變性40 s,35℃退火40 s,72℃延伸90 s,進行5箇循環,94℃變性40 s,50℃退火40 s,72℃延伸90 s,進行32箇循環,最後72℃延伸5 min.在此條件下得到的SRAP標記可為南瓜遺傳多樣性、分子標記及輔助育種等研究提供穩定有效的手段.
이용L45정교설계대영향남과SRAP반응체계적MgCl2농도、dNTPs농도、Taq매함량、인물농도급모판DNA농도등5개인소진행료사선,쾌속득도은정성화중복성호적남과SRAP확증체계.대복성온도、PCR순배차수등영향남과SRAP확증결과적중요인소진행료우화.최종우화적남과SRAP반응체계위25 μL반응액중:10×buffer2.5 μL, 0.2 mmol/L dNTPs, 인물0.2 μmol/L,1.5 mmol/LMgCl2, DNA모판6 ng/μL, Taq매1.5 U.본연구최종학립적PCR반응정서위: 94℃예변성5 min, 94℃변성40 s,35℃퇴화40 s,72℃연신90 s,진행5개순배,94℃변성40 s,50℃퇴화40 s,72℃연신90 s,진행32개순배,최후72℃연신5 min.재차조건하득도적SRAP표기가위남과유전다양성、분자표기급보조육충등연구제공은정유효적수단.
