安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2008年
6期
603-607
,共5页
姚丽娟%罗以勤%孔建新%赵亮%濮跃晨%马筱玲
姚麗娟%囉以勤%孔建新%趙亮%濮躍晨%馬篠玲
요려연%라이근%공건신%조량%복약신%마소령
绿色荧光蛋白质类
綠色熒光蛋白質類
록색형광단백질류
目的 分析融合蛋白tumstatin-EGFP在中国仓鼠卵巢细胞(CH0)中的表达及生物学活性.方法 经过酶切和测序正确的真核表达载体PIRESneo3/STL-EGFP、PIRESneo3/sig-EGFP和空载体稳定转染CHO细胞后,用Western blot从细胞上清液中检测融合蛋白的表达、倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达.通过生长曲线分析外源基因的导入对CHO细胞生长的影响,MTT法和管状形成抑制试验评估tumstatin-EGFP融合蛋白的tumstatin样活性,体外靶向试验验证tumstatin能否携带融合蛋白特异性结合内皮细胞.结果 获得了稳定转染的CHO细胞系.生长曲线表明转染后的较未转染的CHO细胞生长缓慢,MTY试验和管状形成抑制试验分别证实了融合蛋白tumstatin-EGFP具有抑制内皮细胞增殖,明显抑制血管管状结构的形成的作用;体外靶向试验也验证了tumstatin-EGFP能够特异性结合内皮细胞.结论 重组真核表达载体在CHO细胞获得稳定表达,融合蛋白tumstatin-EGFP的表达不影响tumstatin和EGFP各自的生物学活性,并且在体外tumstatin能特异性携带:EGFP靶向内皮细胞,为进一步tumstatin及其融合蛋白的研究奠定基础.
目的 分析融閤蛋白tumstatin-EGFP在中國倉鼠卵巢細胞(CH0)中的錶達及生物學活性.方法 經過酶切和測序正確的真覈錶達載體PIRESneo3/STL-EGFP、PIRESneo3/sig-EGFP和空載體穩定轉染CHO細胞後,用Western blot從細胞上清液中檢測融閤蛋白的錶達、倒置熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的錶達.通過生長麯線分析外源基因的導入對CHO細胞生長的影響,MTT法和管狀形成抑製試驗評估tumstatin-EGFP融閤蛋白的tumstatin樣活性,體外靶嚮試驗驗證tumstatin能否攜帶融閤蛋白特異性結閤內皮細胞.結果 穫得瞭穩定轉染的CHO細胞繫.生長麯線錶明轉染後的較未轉染的CHO細胞生長緩慢,MTY試驗和管狀形成抑製試驗分彆證實瞭融閤蛋白tumstatin-EGFP具有抑製內皮細胞增殖,明顯抑製血管管狀結構的形成的作用;體外靶嚮試驗也驗證瞭tumstatin-EGFP能夠特異性結閤內皮細胞.結論 重組真覈錶達載體在CHO細胞穫得穩定錶達,融閤蛋白tumstatin-EGFP的錶達不影響tumstatin和EGFP各自的生物學活性,併且在體外tumstatin能特異性攜帶:EGFP靶嚮內皮細胞,為進一步tumstatin及其融閤蛋白的研究奠定基礎.
목적 분석융합단백tumstatin-EGFP재중국창서란소세포(CH0)중적표체급생물학활성.방법 경과매절화측서정학적진핵표체재체PIRESneo3/STL-EGFP、PIRESneo3/sig-EGFP화공재체은정전염CHO세포후,용Western blot종세포상청액중검측융합단백적표체、도치형광현미경관찰록색형광단백적표체.통과생장곡선분석외원기인적도입대CHO세포생장적영향,MTT법화관상형성억제시험평고tumstatin-EGFP융합단백적tumstatin양활성,체외파향시험험증tumstatin능부휴대융합단백특이성결합내피세포.결과 획득료은정전염적CHO세포계.생장곡선표명전염후적교미전염적CHO세포생장완만,MTY시험화관상형성억제시험분별증실료융합단백tumstatin-EGFP구유억제내피세포증식,명현억제혈관관상결구적형성적작용;체외파향시험야험증료tumstatin-EGFP능구특이성결합내피세포.결론 중조진핵표체재체재CHO세포획득은정표체,융합단백tumstatin-EGFP적표체불영향tumstatin화EGFP각자적생물학활성,병차재체외tumstatin능특이성휴대:EGFP파향내피세포,위진일보tumstatin급기융합단백적연구전정기출.
