CAJ | 학술논문

目的研究蛋白激酶C(PKC)及其亚型对缺氧引起的肺动脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达变化的调控作用.方法将原代培养的猪肺动脉内皮细胞置于缺氧(5%O2)条件培养2、6、12、24、48 h,用RT-PCR的方法检测eNOS mRNA的含量.用蛋白质免疫印迹技术检测eNOS和8种PKC亚型的表达水平.加入选择性PKC抑制剂BIMⅠ(1 μmol/L)和G6983(1 μmol/L)后观察其对5%O2所引起的eNOS mRNA水平变化的影响.采用瞬时转染的方法,通过荧光素酶报告基因实验检测eNOS基因转录起始点上游长1.6 kb启动子区域的活性.加入转录抑制剂放线菌素D后比较不同时间点常氧培养组和5%O2培养组eNOS mRNA的含量.结果 5%O2培养12 h可使肺动脉内皮细胞eNOS表达增加,24 h达高峰.缺氧24 h组eNOS mRNA和蛋白质水平分别是常氧组的171%±18%(P<0.01)和166%±21% (P<0.05).BIMⅠ和G6983可抑制缺氧24 h引起的eNOS mRNA表达上调.缺氧时新型蛋白激酶Cε(nPKCε)发生了膜转位.报告基因实验表明,缺氧24 h肺动脉内皮细胞eNOS基因启动子活性明显增加,为常氧组的(2.29±0.73)倍.放线菌素D实验表明缺氧对肺动脉内皮细胞eNOS mRNA的稳定性无明显影响.结果表明,缺氧上调eNOS mRNA是由于基因转录增强而不是mRNA稳定性增加所致.结论缺氧通过增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的转录上调eNOS基因的表达,此过程与nPKCε的激活有关.
목적연구단백격매C(PKC)급기아형대결양인기적폐동맥내피세포내피형일양화담합매(eNOS)기인표체변화적조공작용.방법장원대배양적저폐동맥내피세포치우결양(5%O2)조건배양2、6、12、24、48 h,용RT-PCR적방법검측eNOS mRNA적함량.용단백질면역인적기술검측eNOS화8충PKC아형적표체수평.가입선택성PKC억제제BIMⅠ(1 μmol/L)화G6983(1 μmol/L)후관찰기대5%O2소인기적eNOS mRNA수평변화적영향.채용순시전염적방법,통과형광소매보고기인실험검측eNOS기인전록기시점상유장1.6 kb계동자구역적활성.가입전록억제제방선균소D후비교불동시간점상양배양조화5%O2배양조eNOS mRNA적함량.결과 5%O2배양12 h가사폐동맥내피세포eNOS표체증가,24 h체고봉.결양24 h조eNOS mRNA화단백질수평분별시상양조적171%±18%(P<0.01)화166%±21% (P<0.05).BIMⅠ화G6983가억제결양24 h인기적eNOS mRNA표체상조.결양시신형단백격매Cε(nPKCε)발생료막전위.보고기인실험표명,결양24 h폐동맥내피세포eNOS기인계동자활성명현증가,위상양조적(2.29±0.73)배.방선균소D실험표명결양대폐동맥내피세포eNOS mRNA적은정성무명현영향.결과표명,결양상조eNOS mRNA시유우기인전록증강이불시mRNA은정성증가소치.결론결양통과증강폐동맥내피세포eNOS기인적전록상조eNOS기인적표체,차과정여nPKCε적격활유관.