中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
9期
62-67
,共6页
张翔峰%何逸民%曹宗喜%孔留五%张得玉%秦宏阳%张桂红
張翔峰%何逸民%曹宗喜%孔留五%張得玉%秦宏暘%張桂紅
장상봉%하일민%조종희%공류오%장득옥%진굉양%장계홍
猪圆环病毒2型%猪繁殖与呼吸综合征病毒%重组杆状病毒%BALB/c小鼠免疫试验
豬圓環病毒2型%豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%重組桿狀病毒%BALB/c小鼠免疫試驗
저원배병독2형%저번식여호흡종합정병독%중조간상병독%BALB/c소서면역시험
参照GenBank上收录的基因组序列自行设计引物,分别扩增猪圆环病毒2型ORF2和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5.将外源基因分别捕入经改造的杆状病毒穿梭载体pFVC,获得3种重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2.将重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2分别转入带有杆状病毒骨架的DH10BacTM E.coli感受态细胞中.提取高质量的重组质粒rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF5-ORF2,将重组质粒转染Sf9细胞,获取重组病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2.通过间接免疫荧光检测证实了外源基因正确表达.重组杆状病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2对BALB/c小鼠的免疫试验结果显示,rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2均能够刺激小鼠机体产生免疫应答,产生抗体,并能持续较长时间.
參照GenBank上收錄的基因組序列自行設計引物,分彆擴增豬圓環病毒2型ORF2和豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒ORF5.將外源基因分彆捕入經改造的桿狀病毒穿梭載體pFVC,穫得3種重組質粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2.將重組質粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2分彆轉入帶有桿狀病毒骨架的DH10BacTM E.coli感受態細胞中.提取高質量的重組質粒rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF5-ORF2,將重組質粒轉染Sf9細胞,穫取重組病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2.通過間接免疫熒光檢測證實瞭外源基因正確錶達.重組桿狀病毒rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2對BALB/c小鼠的免疫試驗結果顯示,rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2均能夠刺激小鼠機體產生免疫應答,產生抗體,併能持續較長時間.
삼조GenBank상수록적기인조서렬자행설계인물,분별확증저원배병독2형ORF2화저번식여호흡종합정병독ORF5.장외원기인분별포입경개조적간상병독천사재체pFVC,획득3충중조질립pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2.장중조질립pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2분별전입대유간상병독골가적DH10BacTM E.coli감수태세포중.제취고질량적중조질립rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF5-ORF2,장중조질립전염Sf9세포,획취중조병독rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2.통과간접면역형광검측증실료외원기인정학표체.중조간상병독rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2대BALB/c소서적면역시험결과현시,rAc-ORF2、rAc-ORF5、rAc-ORF5-ORF2균능구자격소서궤체산생면역응답,산생항체,병능지속교장시간.
