解剖学研究
解剖學研究
해부학연구
ANATOMY RESEARCH
2011年
1期
33-36
,共4页
郎洪刚%曹文斌%牛道立%何芬
郎洪剛%曹文斌%牛道立%何芬
랑홍강%조문빈%우도립%하분
BDNF%腺病毒%基因治疗%脑损伤
BDNF%腺病毒%基因治療%腦損傷
BDNF%선병독%기인치료%뇌손상
目的 构建含有大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组腺病毒(AD)载体,并分析其体外表达情况.方法 将采用RT-PCR技术获取的大鼠BDNF的cDNA基因定向克隆入穿梭质粒pAdTrack-CMV中.通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒pAd-BDNF,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Ad-BDNF).重组病毒感染体外培养的Hela细胞后,用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学检测细胞BDNF基因及蛋白表达情况.结果 pAd-BDNF测序结果和预期一致,同源重组并经293细胞包装后形成重组腺病毒Ad-BDNF,重组病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF.结论 成功制备了重组腺病毒Ad-BDNF,感染细胞证实其呈分泌表达,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病治疗的研究打下了基础.
目的 構建含有大鼠腦源性神經營養因子(BDNF)基因的重組腺病毒(AD)載體,併分析其體外錶達情況.方法 將採用RT-PCR技術穫取的大鼠BDNF的cDNA基因定嚮剋隆入穿梭質粒pAdTrack-CMV中.通過與腺病毒骨架載體pAdeasy-1在細菌內同源重組形成重組腺病毒質粒pAd-BDNF,轉染人胚腎293細胞後包裝成有感染能力的重組腺病毒顆粒(Ad-BDNF).重組病毒感染體外培養的Hela細胞後,用RT-PCR、Western blot及免疫細胞化學檢測細胞BDNF基因及蛋白錶達情況.結果 pAd-BDNF測序結果和預期一緻,同源重組併經293細胞包裝後形成重組腺病毒Ad-BDNF,重組病毒感染Hela細胞後能高水平錶達BDNF.結論 成功製備瞭重組腺病毒Ad-BDNF,感染細胞證實其呈分泌錶達,為將其進一步應用于神經繫統損傷性疾病治療的研究打下瞭基礎.
목적 구건함유대서뇌원성신경영양인자(BDNF)기인적중조선병독(AD)재체,병분석기체외표체정황.방법 장채용RT-PCR기술획취적대서BDNF적cDNA기인정향극륭입천사질립pAdTrack-CMV중.통과여선병독골가재체pAdeasy-1재세균내동원중조형성중조선병독질립pAd-BDNF,전염인배신293세포후포장성유감염능력적중조선병독과립(Ad-BDNF).중조병독감염체외배양적Hela세포후,용RT-PCR、Western blot급면역세포화학검측세포BDNF기인급단백표체정황.결과 pAd-BDNF측서결과화예기일치,동원중조병경293세포포장후형성중조선병독Ad-BDNF,중조병독감염Hela세포후능고수평표체BDNF.결론 성공제비료중조선병독Ad-BDNF,감염세포증실기정분비표체,위장기진일보응용우신경계통손상성질병치료적연구타하료기출.
