国际骨科学杂志
國際骨科學雜誌
국제골과학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF ORTHOPAEDICS
2011年
6期
386-388,391
,共4页
林在俊%肖建如%罗剑%黄权%周振华%陈素%杨兴海%吴志鹏
林在俊%肖建如%囉劍%黃權%週振華%陳素%楊興海%吳誌鵬
림재준%초건여%라검%황권%주진화%진소%양흥해%오지붕
Smad6基因%慢病毒%RNA干扰%基因重组%骨髓间充质干细胞
Smad6基因%慢病毒%RNA榦擾%基因重組%骨髓間充質榦細胞
Smad6기인%만병독%RNA간우%기인중조%골수간충질간세포
目的 构建大鼠Smad6基因的慢病毒干扰载体,并在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中验证其基因沉默效率.方法 针对大鼠Smad6基因设计、合成两对Smad6-shRNA干扰序列,并将其重组到pLKO.1质粒载体中.测序验证后在HEK293T细胞内组装慢病毒.最后体外分离培养大鼠BMSC,通过慢病毒感染将Smad6干扰序列转导到细胞内,实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)及Western蛋白印迹法检测其对Smad6基因的干扰效率.结果 成功构建并包装2个大鼠Smad6基因干扰的慢病毒载体和慢病毒.与阴性对照组比较,重组慢病毒感染大鼠BMSC后经实时荧光定量PCR验证,2种重组病毒的干扰效率分别达到92.5％和93.4％,Western蛋白印迹法显示Smad6基因被干扰后蛋白表达明显下降.结论 成功构建出可有效干扰大鼠Smad6基因的慢病毒载体,为进一步研究其功能及应用提供有效工具.
目的 構建大鼠Smad6基因的慢病毒榦擾載體,併在大鼠骨髓間充質榦細胞(BMSC)中驗證其基因沉默效率.方法 針對大鼠Smad6基因設計、閤成兩對Smad6-shRNA榦擾序列,併將其重組到pLKO.1質粒載體中.測序驗證後在HEK293T細胞內組裝慢病毒.最後體外分離培養大鼠BMSC,通過慢病毒感染將Smad6榦擾序列轉導到細胞內,實時熒光定量聚閤酶鏈式反應(PCR)及Western蛋白印跡法檢測其對Smad6基因的榦擾效率.結果 成功構建併包裝2箇大鼠Smad6基因榦擾的慢病毒載體和慢病毒.與陰性對照組比較,重組慢病毒感染大鼠BMSC後經實時熒光定量PCR驗證,2種重組病毒的榦擾效率分彆達到92.5％和93.4％,Western蛋白印跡法顯示Smad6基因被榦擾後蛋白錶達明顯下降.結論 成功構建齣可有效榦擾大鼠Smad6基因的慢病毒載體,為進一步研究其功能及應用提供有效工具.
목적 구건대서Smad6기인적만병독간우재체,병재대서골수간충질간세포(BMSC)중험증기기인침묵효솔.방법 침대대서Smad6기인설계、합성량대Smad6-shRNA간우서렬,병장기중조도pLKO.1질립재체중.측서험증후재HEK293T세포내조장만병독.최후체외분리배양대서BMSC,통과만병독감염장Smad6간우서렬전도도세포내,실시형광정량취합매련식반응(PCR)급Western단백인적법검측기대Smad6기인적간우효솔.결과 성공구건병포장2개대서Smad6기인간우적만병독재체화만병독.여음성대조조비교,중조만병독감염대서BMSC후경실시형광정량PCR험증,2충중조병독적간우효솔분별체도92.5％화93.4％,Western단백인적법현시Smad6기인피간우후단백표체명현하강.결론 성공구건출가유효간우대서Smad6기인적만병독재체,위진일보연구기공능급응용제공유효공구.
