畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
2期
270-274
,共5页
田宏%侯相民%吴锦艳%陈妍%尚佑军%刘湘涛
田宏%侯相民%吳錦豔%陳妍%尚祐軍%劉湘濤
전굉%후상민%오금염%진연%상우군%류상도
猪瘟病毒%复合多表位抗原基因%融合表达%活性分析
豬瘟病毒%複閤多錶位抗原基因%融閤錶達%活性分析
저온병독%복합다표위항원기인%융합표체%활성분석
体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析.人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT500,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,纯化表达产物并免疫兔.结果:通过IPTG诱导目的基因可高效表达,SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.9 mmol· L-1的IPTG进行诱导,7h后表达量最高,产物分泌表达,相对分子质量约43 ku,表达产量约占菌体总蛋白的30％.Western blotting检测表明,表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应；兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护(根据发热反应评价)兔.结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性,这为应用该融合蛋白制备CSFV免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础.
體外錶達豬瘟病毒(CFSV)T、B細胞錶位,併對錶達產物的免疫原性進行分析.人工閤成CFSV的多箇T、B細胞錶位及錶位之間的連接linker基因,併將該基因插入pGEX-6P-1錶達載體,經酶切和測序鑒定穫得重組暘性剋隆,成功構建瞭CFSV複閤多錶位抗原基因的原覈錶達質粒pGEX-BT500,轉化E.coli BL21,IPTG誘導錶達,純化錶達產物併免疫兔.結果:通過IPTG誘導目的基因可高效錶達,SDS-PAGE結果錶明,以終濃度為0.9 mmol· L-1的IPTG進行誘導,7h後錶達量最高,產物分泌錶達,相對分子質量約43 ku,錶達產量約佔菌體總蛋白的30％.Western blotting檢測錶明,錶達的融閤蛋白能與豬瘟暘性血清髮生特異性反應；兔攻毒試驗錶明所免疫錶達產物可保護(根據髮熱反應評價)兔.結果錶明錶達穫得的產物具有良好的反應原性,這為應用該融閤蛋白製備CSFV免疫血清學診斷試劑和多錶位疫苗研究奠定瞭基礎.
체외표체저온병독(CFSV)T、B세포표위,병대표체산물적면역원성진행분석.인공합성CFSV적다개T、B세포표위급표위지간적련접linker기인,병장해기인삽입pGEX-6P-1표체재체,경매절화측서감정획득중조양성극륭,성공구건료CFSV복합다표위항원기인적원핵표체질립pGEX-BT500,전화E.coli BL21,IPTG유도표체,순화표체산물병면역토.결과:통과IPTG유도목적기인가고효표체,SDS-PAGE결과표명,이종농도위0.9 mmol· L-1적IPTG진행유도,7h후표체량최고,산물분비표체,상대분자질량약43 ku,표체산량약점균체총단백적30％.Western blotting검측표명,표체적융합단백능여저온양성혈청발생특이성반응；토공독시험표명소면역표체산물가보호(근거발열반응평개)토.결과표명표체획득적산물구유량호적반응원성,저위응용해융합단백제비CSFV면역혈청학진단시제화다표위역묘연구전정료기출.
