CAJ | 학술논문

分离克隆了腾冲嗜热杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)海藻糖磷酸化酶(TreP)的编码基因(treP), 该酶可催化以葡萄糖和2-1-磷酸葡萄糖为底物的海藻糖合成反应及其逆向的分解反应. 反向mRNA点杂交实验表明, 腾冲嗜热杆菌中treP基因在高盐胁迫条件下表达量增加, 而在海藻糖诱导条件下表达量降低. 将该基因导入不含TreP的大肠杆菌中进行诱导表达, SDS-PAGE表明, 异源表达的TreP分子量约为90 kD, 与预期值相同. 通过葡萄糖氧化酶法测定分解产物葡萄糖的产率表明: TreP催化海藻糖分解反应的最适温度是70℃, 最适pH值为7.0; 通过HPLC检测合成产物海藻糖的产率表明: TreP催化合成反应的最适温度为70℃, 最适pH值为6.0. 在最适反应条件下, 50μg的TreP粗酶可催化25 mmol/L α-1-磷酸葡萄糖与葡萄糖在30 min合成11.6 mmol/L海藻糖; 而同量的酶在同样时间内仅能将250 mmol/L海藻糖分解生成1.5 mmol/L葡萄糖. 以上体内胁迫和诱导表达分析及体外酶学性质分析均证明该酶的主要功能是催化海藻糖的合成反应. 热稳定性实验表明, 该酶性质比较稳定, 在50℃下温育7 h还能保持77%以上的活性, 是一个有潜在工业用途的新的热稳定海藻糖合成酶.
분리극륭료등충기열간균(Thermoanaerobacter tengcongensis)해조당린산화매(TreP)적편마기인(treP), 해매가최화이포도당화2-1-린산포도당위저물적해조당합성반응급기역향적분해반응. 반향mRNA점잡교실험표명, 등충기열간균중treP기인재고염협박조건하표체량증가, 이재해조당유도조건하표체량강저. 장해기인도입불함TreP적대장간균중진행유도표체, SDS-PAGE표명, 이원표체적TreP분자량약위90 kD, 여예기치상동. 통과포도당양화매법측정분해산물포도당적산솔표명: TreP최화해조당분해반응적최괄온도시70℃, 최괄pH치위7.0; 통과HPLC검측합성산물해조당적산솔표명: TreP최화합성반응적최괄온도위70℃, 최괄pH치위6.0. 재최괄반응조건하, 50μg적TreP조매가최화25 mmol/L α-1-린산포도당여포도당재30 min합성11.6 mmol/L해조당; 이동량적매재동양시간내부능장250 mmol/L해조당분해생성1.5 mmol/L포도당. 이상체내협박화유도표체분석급체외매학성질분석균증명해매적주요공능시최화해조당적합성반응. 열은정성실험표명, 해매성질비교은정, 재50℃하온육7 h환능보지77%이상적활성, 시일개유잠재공업용도적신적열은정해조당합성매.