生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
206-210
,共5页
潘海韵%程郢%朱苏文%范军
潘海韻%程郢%硃囌文%範軍
반해운%정영%주소문%범군
尿卟啉原Ⅲ甲基化酶%玉米%定点突变%三甲基咕啉
尿卟啉原Ⅲ甲基化酶%玉米%定點突變%三甲基咕啉
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尿卟啉原Ⅲ甲基化酶是一种新型的红色荧光指示蛋白,但是,在大肠杆菌重组表达的SUMT水溶性相对较低,限制了它的应用范围,而且对于结合在蛋白的色素组分尚不清楚.利用定点突变产生玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶L88R/L89G双突变体和L166A突变体,两种突变体分别在大肠杆菌中重组表达,Ni-NTA一步纯化.紫外可见光谱扫描和质谱分析确定从纯化的L88R/L89G双突变体蛋白分离的色素组分.L88R/L89G双突变体在大肠杆菌细胞内有酶活,而L166A突变体胞内酶活丧失.结合蛋白的主要组分为三甲基化咕啉.纯化的双突变体蛋白水溶性增加,为提高它作为荧光指示蛋白检测外源融合蛋白的水溶性打下基础.
尿卟啉原Ⅲ甲基化酶是一種新型的紅色熒光指示蛋白,但是,在大腸桿菌重組錶達的SUMT水溶性相對較低,限製瞭它的應用範圍,而且對于結閤在蛋白的色素組分尚不清楚.利用定點突變產生玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶L88R/L89G雙突變體和L166A突變體,兩種突變體分彆在大腸桿菌中重組錶達,Ni-NTA一步純化.紫外可見光譜掃描和質譜分析確定從純化的L88R/L89G雙突變體蛋白分離的色素組分.L88R/L89G雙突變體在大腸桿菌細胞內有酶活,而L166A突變體胞內酶活喪失.結閤蛋白的主要組分為三甲基化咕啉.純化的雙突變體蛋白水溶性增加,為提高它作為熒光指示蛋白檢測外源融閤蛋白的水溶性打下基礎.
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