天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2007年
11期
801-803,后插1
,共4页
洪敬欣%步天栩%史雪彬%邵洁%姚智%杨洁
洪敬訢%步天栩%史雪彬%邵潔%姚智%楊潔
홍경흔%보천허%사설빈%소길%요지%양길
抗体,单克隆%基因表达%遗传载体%质粒%真核细胞%逆转录聚合酶链反应%人类
抗體,單剋隆%基因錶達%遺傳載體%質粒%真覈細胞%逆轉錄聚閤酶鏈反應%人類
항체,단극륭%기인표체%유전재체%질립%진핵세포%역전록취합매련반응%인류
目的:构建人Prp8基因全长真核表达质粒.方法:从HeLa细胞中提取总体RNA,两步法合成cDNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,扩增出人Prp8基因的四段序列,首先克隆至pTZ57R/T载体,再定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-Prp8重组质粒.结果:RT-PCR法获得Prp8基因的4段序列,长度分别为2025、1 090、1 966、1 963 bp,分别与pTZ57R仃载体连接后,选择合适的酶切位点再连接成全长序列,然后将全长序列和pcDNA3.1(+)真核表达载体连接、转化、酶切鉴定及序列分析后,证实pcDNA3.1(+)-Prp8重组质粒构建成功.结论:成功克隆了人Prp8的编码基因,并构建了表达载体pcDNA3.1(+)-Prp8.
目的:構建人Prp8基因全長真覈錶達質粒.方法:從HeLa細胞中提取總體RNA,兩步法閤成cDNA,利用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法,擴增齣人Prp8基因的四段序列,首先剋隆至pTZ57R/T載體,再定嚮剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1(+),構建pcDNA3.1(+)-Prp8重組質粒.結果:RT-PCR法穫得Prp8基因的4段序列,長度分彆為2025、1 090、1 966、1 963 bp,分彆與pTZ57R仃載體連接後,選擇閤適的酶切位點再連接成全長序列,然後將全長序列和pcDNA3.1(+)真覈錶達載體連接、轉化、酶切鑒定及序列分析後,證實pcDNA3.1(+)-Prp8重組質粒構建成功.結論:成功剋隆瞭人Prp8的編碼基因,併構建瞭錶達載體pcDNA3.1(+)-Prp8.
목적:구건인Prp8기인전장진핵표체질립.방법:종HeLa세포중제취총체RNA,량보법합성cDNA,이용역전록취합매련반응(RT-PCR)법,확증출인Prp8기인적사단서렬,수선극륭지pTZ57R/T재체,재정향극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(+),구건pcDNA3.1(+)-Prp8중조질립.결과:RT-PCR법획득Prp8기인적4단서렬,장도분별위2025、1 090、1 966、1 963 bp,분별여pTZ57R정재체련접후,선택합괄적매절위점재련접성전장서렬,연후장전장서렬화pcDNA3.1(+)진핵표체재체련접、전화、매절감정급서렬분석후,증실pcDNA3.1(+)-Prp8중조질립구건성공.결론:성공극륭료인Prp8적편마기인,병구건료표체재체pcDNA3.1(+)-Prp8.
