CAJ | 학술논문

目的:比较脐血贴壁层细胞和骨髓的基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响.方法:实验于2005-02/07在吉林省肿瘤防治研究所完成.①对象:正常足月顺产儿脐带由长春市妇产医院提供;肋骨取自吉林省肿瘤医院外科手术患者,排除血液疾患.产妇及外科手术患者对治疗及实验均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:采用红细胞裂解法制备有核细胞,以Ficoll-paque淋巴细胞分层液按密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞,体外培养24 h后去除悬浮细胞,收集脐血贴壁层细胞,加入到24孔板中,2×106 L-1/孔,再加入含12.5%马血清、12.5%胎牛血清、1×10-7 mol/L氢化考地松的IMDM培养体系1 mL.将肋骨剪成3 cm小块,冲洗髓腔收集细胞悬液,用淋巴细胞分层液分离出骨髓单个核细胞,同法进行骨髓基质细胞的培养.分别将两种细胞于37 ℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养3周后,各自加入到24孔板,2×106 L-1/孔,同时每孔再加入1×106 L-1脐血单个核细胞,培养7 d.以未添加脐血贴壁层细胞及骨髓基质细胞的脐血单个核细胞作为空白对照.③实验评估:倒置显微镜下观察脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的生长状态.采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞周期分布.甲基纤维素半固体培养法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位情况. 结果:①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的形态:培养2周时,多数脐血贴壁层细胞呈大小不等的圆形、椭圆形,少部分呈不规则形;骨髓基质细胞主要为梭形,细胞排列成漩涡状、辐射状或相互缠绕成束状.②细胞周期:与空白对照相比,经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预的脐血单个核细胞S+G2+M期所占比例均显著升高(P < 0.05).③混合集落形成单位:经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预后的脐血单个核细胞,其混合集落形成单位的数量显著高于空白对照(P < 0.05).结论:①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞在形态上具有一定差异,但均能提高脐血单个核细胞体外增殖能力.②脐血贴壁层细胞可替代骨髓基质细胞作为脐血造血细胞体外扩增的辅助条件. 目的:比較臍血貼壁層細胞和骨髓的基質細胞對臍血單箇覈細胞增殖能力的影響.方法:實驗于2005-02/07在吉林省腫瘤防治研究所完成.①對象:正常足月順產兒臍帶由長春市婦產醫院提供;肋骨取自吉林省腫瘤醫院外科手術患者,排除血液疾患.產婦及外科手術患者對治療及實驗均籤署知情同意書,實驗經醫院醫學倫理委員會批準.②實驗方法:採用紅細胞裂解法製備有覈細胞,以Ficoll-paque淋巴細胞分層液按密度梯度離心法分離齣臍血單箇覈細胞,體外培養24 h後去除懸浮細胞,收集臍血貼壁層細胞,加入到24孔闆中,2×106 L-1/孔,再加入含12.5%馬血清、12.5%胎牛血清、1×10-7 mol/L氫化攷地鬆的IMDM培養體繫1 mL.將肋骨剪成3 cm小塊,遲洗髓腔收集細胞懸液,用淋巴細胞分層液分離齣骨髓單箇覈細胞,同法進行骨髓基質細胞的培養.分彆將兩種細胞于37 ℃、體積分數為0.05的CO2條件下培養3週後,各自加入到24孔闆,2×106 L-1/孔,同時每孔再加入1×106 L-1臍血單箇覈細胞,培養7 d.以未添加臍血貼壁層細胞及骨髓基質細胞的臍血單箇覈細胞作為空白對照.③實驗評估:倒置顯微鏡下觀察臍血貼壁層細胞與骨髓基質細胞的生長狀態.採用流式細胞儀測定臍血單箇覈細胞週期分佈.甲基纖維素半固體培養法測定臍血單箇覈細胞混閤集落形成單位情況. 結果:①臍血貼壁層細胞與骨髓基質細胞的形態:培養2週時,多數臍血貼壁層細胞呈大小不等的圓形、橢圓形,少部分呈不規則形;骨髓基質細胞主要為梭形,細胞排列成漩渦狀、輻射狀或相互纏繞成束狀.②細胞週期:與空白對照相比,經臍血貼壁層細胞、骨髓基質細胞榦預的臍血單箇覈細胞S+G2+M期所佔比例均顯著升高(P < 0.05).③混閤集落形成單位:經臍血貼壁層細胞、骨髓基質細胞榦預後的臍血單箇覈細胞,其混閤集落形成單位的數量顯著高于空白對照(P < 0.05).結論:①臍血貼壁層細胞與骨髓基質細胞在形態上具有一定差異,但均能提高臍血單箇覈細胞體外增殖能力.②臍血貼壁層細胞可替代骨髓基質細胞作為臍血造血細胞體外擴增的輔助條件.
목적:비교제혈첩벽층세포화골수적기질세포대제혈단개핵세포증식능력적영향.방법:실험우2005-02/07재길림성종류방치연구소완성.①대상:정상족월순산인제대유장춘시부산의원제공;륵골취자길림성종류의원외과수술환자,배제혈액질환.산부급외과수술환자대치료급실험균첨서지정동의서,실험경의원의학윤리위원회비준.②실험방법:채용홍세포렬해법제비유핵세포,이Ficoll-paque림파세포분층액안밀도제도리심법분리출제혈단개핵세포,체외배양24 h후거제현부세포,수집제혈첩벽층세포,가입도24공판중,2×106 L-1/공,재가입함12.5%마혈청、12.5%태우혈청、1×10-7 mol/L경화고지송적IMDM배양체계1 mL.장륵골전성3 cm소괴,충세수강수집세포현액,용림파세포분층액분리출골수단개핵세포,동법진행골수기질세포적배양.분별장량충세포우37 ℃、체적분수위0.05적CO2조건하배양3주후,각자가입도24공판,2×106 L-1/공,동시매공재가입1×106 L-1제혈단개핵세포,배양7 d.이미첨가제혈첩벽층세포급골수기질세포적제혈단개핵세포작위공백대조.③실험평고:도치현미경하관찰제혈첩벽층세포여골수기질세포적생장상태.채용류식세포의측정제혈단개핵세포주기분포.갑기섬유소반고체배양법측정제혈단개핵세포혼합집락형성단위정황. 결과:①제혈첩벽층세포여골수기질세포적형태:배양2주시,다수제혈첩벽층세포정대소불등적원형、타원형,소부분정불규칙형;골수기질세포주요위사형,세포배렬성선와상、복사상혹상호전요성속상.②세포주기:여공백대조상비,경제혈첩벽층세포、골수기질세포간예적제혈단개핵세포S+G2+M기소점비례균현저승고(P < 0.05).③혼합집락형성단위:경제혈첩벽층세포、골수기질세포간예후적제혈단개핵세포,기혼합집락형성단위적수량현저고우공백대조(P < 0.05).결론:①제혈첩벽층세포여골수기질세포재형태상구유일정차이,단균능제고제혈단개핵세포체외증식능력.②제혈첩벽층세포가체대골수기질세포작위제혈조혈세포체외확증적보조조건.