解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2008年
4期
547-551
,共5页
秦洁%郭新%张键荣%桂耀庭%蔡志明
秦潔%郭新%張鍵榮%桂耀庭%蔡誌明
진길%곽신%장건영%계요정%채지명
胚胎于细胞%拟胚体%发育%分化%免疫组织化学%小鼠
胚胎于細胞%擬胚體%髮育%分化%免疫組織化學%小鼠
배태우세포%의배체%발육%분화%면역조직화학%소서
目的 探讨小鼠胚胎干细胞来源的拟胚体(EBs)形成以及分化发育90d过程中的形态学特征及基因表达模式.方法 将小鼠胚胎干细胞通过悬浮培养获得EBs,EBs在不添加其他诱导因子的体系中连续悬浮培养,采用形态学观察、免疫组织化学染色和RT-PCR检测EBs培养过程中的细胞发育分化特征和基因表达模式.结果 将胚胎干细胞转移到去除白血病抑制因子(LIF)的悬浮培养液中培养24h左右即可形成EBs;培养3d左右,部分EBs出现简单胚体结构;在EBs分化7d左右,逐步向空腔化胚体发育;培养9d左右,EBs可发育为原始的囊性胚体结构;培养11d左右,EBs形成典型的、结构完整的三胚层结构.HE染色结果显示,发育早期的EBs包含大量尚未完全分化的ES细胞,随着培养时间的延长,EBs向空腔化、囊性胚体发育,逐渐形成类似于早期组织的形态.悬浮培养7周左右,EBs的发育分化基本停止.免疫组织化学染色结果表明,中胚层心肌细胞特异性标志蛋白cTnT,外胚层特异性标志蛋白Nestin在15d的EB8中表达呈阳性.RT-PCR检测也显示形成的EBs表达外胚层特征性基因Vimentin、Nestin,中胚层特征性基因Flk-1、Gata-1和内胚层特征性基因Transthyretin、α-fetoptotein.结论 小鼠胚胎干细胞来源的EBs具有分化为3个胚层的能力,EBs形成的三维结构能够有效的启动细胞的分化;EBs来源的三胚层细胞的发育分化时序和特征,将为鉴定胚胎干细胞来源的分化细胞提供重要参照.
目的 探討小鼠胚胎榦細胞來源的擬胚體(EBs)形成以及分化髮育90d過程中的形態學特徵及基因錶達模式.方法 將小鼠胚胎榦細胞通過懸浮培養穫得EBs,EBs在不添加其他誘導因子的體繫中連續懸浮培養,採用形態學觀察、免疫組織化學染色和RT-PCR檢測EBs培養過程中的細胞髮育分化特徵和基因錶達模式.結果 將胚胎榦細胞轉移到去除白血病抑製因子(LIF)的懸浮培養液中培養24h左右即可形成EBs;培養3d左右,部分EBs齣現簡單胚體結構;在EBs分化7d左右,逐步嚮空腔化胚體髮育;培養9d左右,EBs可髮育為原始的囊性胚體結構;培養11d左右,EBs形成典型的、結構完整的三胚層結構.HE染色結果顯示,髮育早期的EBs包含大量尚未完全分化的ES細胞,隨著培養時間的延長,EBs嚮空腔化、囊性胚體髮育,逐漸形成類似于早期組織的形態.懸浮培養7週左右,EBs的髮育分化基本停止.免疫組織化學染色結果錶明,中胚層心肌細胞特異性標誌蛋白cTnT,外胚層特異性標誌蛋白Nestin在15d的EB8中錶達呈暘性.RT-PCR檢測也顯示形成的EBs錶達外胚層特徵性基因Vimentin、Nestin,中胚層特徵性基因Flk-1、Gata-1和內胚層特徵性基因Transthyretin、α-fetoptotein.結論 小鼠胚胎榦細胞來源的EBs具有分化為3箇胚層的能力,EBs形成的三維結構能夠有效的啟動細胞的分化;EBs來源的三胚層細胞的髮育分化時序和特徵,將為鑒定胚胎榦細胞來源的分化細胞提供重要參照.
목적 탐토소서배태간세포래원적의배체(EBs)형성이급분화발육90d과정중적형태학특정급기인표체모식.방법 장소서배태간세포통과현부배양획득EBs,EBs재불첨가기타유도인자적체계중련속현부배양,채용형태학관찰、면역조직화학염색화RT-PCR검측EBs배양과정중적세포발육분화특정화기인표체모식.결과 장배태간세포전이도거제백혈병억제인자(LIF)적현부배양액중배양24h좌우즉가형성EBs;배양3d좌우,부분EBs출현간단배체결구;재EBs분화7d좌우,축보향공강화배체발육;배양9d좌우,EBs가발육위원시적낭성배체결구;배양11d좌우,EBs형성전형적、결구완정적삼배층결구.HE염색결과현시,발육조기적EBs포함대량상미완전분화적ES세포,수착배양시간적연장,EBs향공강화、낭성배체발육,축점형성유사우조기조직적형태.현부배양7주좌우,EBs적발육분화기본정지.면역조직화학염색결과표명,중배층심기세포특이성표지단백cTnT,외배층특이성표지단백Nestin재15d적EB8중표체정양성.RT-PCR검측야현시형성적EBs표체외배층특정성기인Vimentin、Nestin,중배층특정성기인Flk-1、Gata-1화내배층특정성기인Transthyretin、α-fetoptotein.결론 소서배태간세포래원적EBs구유분화위3개배층적능력,EBs형성적삼유결구능구유효적계동세포적분화;EBs래원적삼배층세포적발육분화시서화특정,장위감정배태간세포래원적분화세포제공중요삼조.
