中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
6期
761-766
,共6页
汪道峰%娄宁%李小东%曾灿光%张旭%林勇斌
汪道峰%婁寧%李小東%曾燦光%張旭%林勇斌
왕도봉%루저%리소동%증찬광%장욱%림용빈
RNA干扰%食管肿瘤%CXCR4%转移
RNA榦擾%食管腫瘤%CXCR4%轉移
RNA간우%식관종류%CXCR4%전이
[目的]新近研究显示CXCL12/CXCR4通路在食管癌组织中有较高的表达,本研究探讨应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效静默食管癌细胞株Eca109细胞CXCR4的表达.研究CXCL12/CXCR4通路对食管癌Eca109细胞转移能力的影响.[方法]以人CXCR4 mRNA编码序列作为干扰靶点,构建靶向CXCR4的vshRNA表达质粒,另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照vshRNA表达质粒,转染相应组别细胞.研究分为控制组、阴性对照组及静默组.应用实时定量PCR及Western blot检测转染后食管癌细胞CXCR4表达的变化.Transwell侵袭小室实验以穿膜细胞的数量评估各组Eca109食管癌细胞的侵袭能力,MTT法观察Eca109各组细胞与Matrigel胶黏附能力的变化,划痕法检测迁移能力改变.[结果]成功构建CXCR4 shRNA慢病毒载体CXCR4-RNAi-Lv.QPCR及Western blot结果显示静默组Ecal09细胞CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平较阴性对照组及空白组显著降低(P<0.05).CXCR4有效静默后,食管癌Eca109细胞黏附、侵袭及迁移能力显著下降(P<0.05).[结论]慢病毒介导的shRNA能有效地静默食管癌细胞CXCR4基因的表达,阻断CXCL12/CXCR4通路生物学效应,有效抑制食管癌Eca109细胞的转移潜能,提示CXCL12/CXCR4通路在食管鳞癌发展过程中具有重要作用.
[目的]新近研究顯示CXCL12/CXCR4通路在食管癌組織中有較高的錶達,本研究探討應用慢病毒介導的RNA榦擾技術,有效靜默食管癌細胞株Eca109細胞CXCR4的錶達.研究CXCL12/CXCR4通路對食管癌Eca109細胞轉移能力的影響.[方法]以人CXCR4 mRNA編碼序列作為榦擾靶點,構建靶嚮CXCR4的vshRNA錶達質粒,另構建不針對任何已知mRNA的陰性對照vshRNA錶達質粒,轉染相應組彆細胞.研究分為控製組、陰性對照組及靜默組.應用實時定量PCR及Western blot檢測轉染後食管癌細胞CXCR4錶達的變化.Transwell侵襲小室實驗以穿膜細胞的數量評估各組Eca109食管癌細胞的侵襲能力,MTT法觀察Eca109各組細胞與Matrigel膠黏附能力的變化,劃痕法檢測遷移能力改變.[結果]成功構建CXCR4 shRNA慢病毒載體CXCR4-RNAi-Lv.QPCR及Western blot結果顯示靜默組Ecal09細胞CXCR4 mRNA及蛋白的錶達水平較陰性對照組及空白組顯著降低(P<0.05).CXCR4有效靜默後,食管癌Eca109細胞黏附、侵襲及遷移能力顯著下降(P<0.05).[結論]慢病毒介導的shRNA能有效地靜默食管癌細胞CXCR4基因的錶達,阻斷CXCL12/CXCR4通路生物學效應,有效抑製食管癌Eca109細胞的轉移潛能,提示CXCL12/CXCR4通路在食管鱗癌髮展過程中具有重要作用.
[목적]신근연구현시CXCL12/CXCR4통로재식관암조직중유교고적표체,본연구탐토응용만병독개도적RNA간우기술,유효정묵식관암세포주Eca109세포CXCR4적표체.연구CXCL12/CXCR4통로대식관암Eca109세포전이능력적영향.[방법]이인CXCR4 mRNA편마서렬작위간우파점,구건파향CXCR4적vshRNA표체질립,령구건불침대임하이지mRNA적음성대조vshRNA표체질립,전염상응조별세포.연구분위공제조、음성대조조급정묵조.응용실시정량PCR급Western blot검측전염후식관암세포CXCR4표체적변화.Transwell침습소실실험이천막세포적수량평고각조Eca109식관암세포적침습능력,MTT법관찰Eca109각조세포여Matrigel효점부능력적변화,화흔법검측천이능력개변.[결과]성공구건CXCR4 shRNA만병독재체CXCR4-RNAi-Lv.QPCR급Western blot결과현시정묵조Ecal09세포CXCR4 mRNA급단백적표체수평교음성대조조급공백조현저강저(P<0.05).CXCR4유효정묵후,식관암Eca109세포점부、침습급천이능력현저하강(P<0.05).[결론]만병독개도적shRNA능유효지정묵식관암세포CXCR4기인적표체,조단CXCL12/CXCR4통로생물학효응,유효억제식관암Eca109세포적전이잠능,제시CXCL12/CXCR4통로재식관린암발전과정중구유중요작용.
