CAJ | 학술논문

目的研究hBcl-2基因转染对大鼠肝脏抗缺血再灌注损伤的效应,并探讨其减轻移植肝缺血再灌注损伤的可行性.方法 (1)同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Adv-EGFP,Adv-Bcl-2,转染293细胞并包装成腺病毒颗粒后大量扩增和纯化.同法构建空载体病毒质粒;(2)雄性SD大鼠,随机分为Adv-Bcl-2转染组、Adv-EGFP转染组、缺血再灌注组、假手术对照组,以两袖套法建立同种异体肝移植模型.转染组经门静脉灌注转染重组腺病毒Adv-Bcl2-或Adv-EGFP;缺血再灌注组、假手术对照组不予任何处理.实时定量PCR和Western blotting检测各组肝组织bcl-2mRNA和蛋白表达变化;门静脉血流恢复后第0,60及180 min三个时间点测定受体血清AST,LDH,MDA含量.组织切片检测肝细胞形态改变.结果 Adv-Bcl-2转染组bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较Adv-EGFP转染组和对照组明显增高(P<0.01) ;Adv-Bcl-2转染组中血清AST,LDH含量明显低于Adv-EGFP转染组和缺血再灌注组.Adv-Bcl-2组血清MDA水平明显低于缺血再灌注组和Adv-EGFP组(P<0.01).与假手术组比较,Adv-Bcl-2处理组HE染色见少量肝细胞水肿和空泡变性,未见片状或点状坏死等.缺血再灌注组和Adv-EGFP组HE染色镜下观察可见小叶结构破坏、肝细胞弥漫不同程度水样变性、体积明显增大、细胞间边界模糊,还可见大量细胞出现脂肪变性及少量碎片状坏死.结论 Adv-Bcl-2转染能通过诱导bcl-2基因表达减轻移植肝缺血再灌注损伤.
목적 연구hBcl-2기인전염대대서간장항결혈재관주손상적효응,병탐토기감경이식간결혈재관주손상적가행성.방법 (1)동원중조법구건복제결함형중조선병독Adv-EGFP,Adv-Bcl-2,전염293세포병포장성선병독과립후대량확증화순화.동법구건공재체병독질립;(2)웅성SD대서,수궤분위Adv-Bcl-2전염조、Adv-EGFP전염조、결혈재관주조、가수술대조조,이량수투법건립동충이체간이식모형.전염조경문정맥관주전염중조선병독Adv-Bcl2-혹Adv-EGFP;결혈재관주조、가수술대조조불여임하처리.실시정량PCR화Western blotting검측각조간조직bcl-2mRNA화단백표체변화;문정맥혈류회복후제0,60급180 min삼개시간점측정수체혈청AST,LDH,MDA함량.조직절편검측간세포형태개변.결과 Adv-Bcl-2전염조bcl-2 mRNA화단백표체수평교Adv-EGFP전염조화대조조명현증고(P<0.01) ;Adv-Bcl-2전염조중혈청AST,LDH함량명현저우Adv-EGFP전염조화결혈재관주조.Adv-Bcl-2조혈청MDA수평명현저우결혈재관주조화Adv-EGFP조(P<0.01).여가수술조비교,Adv-Bcl-2처리조HE염색견소량간세포수종화공포변성,미견편상혹점상배사등.결혈재관주조화Adv-EGFP조HE염색경하관찰가견소협결구파배、간세포미만불동정도수양변성、체적명현증대、세포간변계모호,환가견대량세포출현지방변성급소량쇄편상배사.결론 Adv-Bcl-2전염능통과유도bcl-2기인표체감경이식간결혈재관주손상.