生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
3期
196-199
,共4页
张荷%代淑燕%毛君婷%王开功%周碧君%文明
張荷%代淑燕%毛君婷%王開功%週碧君%文明
장하%대숙연%모군정%왕개공%주벽군%문명
鸭肠炎病毒核衣壳蛋白%诱饵载体%酵母双杂交%自激活作用
鴨腸炎病毒覈衣殼蛋白%誘餌載體%酵母雙雜交%自激活作用
압장염병독핵의각단백%유이재체%효모쌍잡교%자격활작용
为构建鸭肠炎病毒(DEV)核衣壳蛋白(NP)基因酵母双杂交诱饵载体,采用PCR技术扩增出DEV-NP基因,克隆至酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7中,以PCR检测、限制性酶切和序列测定等方法进行鉴定;然后采用PEG/LiA.法将阳性质粒pGBKT7-NP转化酵母Y2HGold,在不同营养缺失型培养基进行自激活检测,结果显示,经PCR检测和EcoR I/BamH I双酶切,可见到与预期相一致的目的片段;测序表明该片段含DEV NP基因全部序列;转化Y2HGold酵母菌后,在SD/-Trp/X-a-Gal 固体培养基上长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/X-a-GaUAbA固体培养基上未见有菌落生长.无自激活作用的诱饵载体pGBKT7NP的成功构建,为DEV NP宿主结合蛋白的筛选莫定了基础.
為構建鴨腸炎病毒(DEV)覈衣殼蛋白(NP)基因酵母雙雜交誘餌載體,採用PCR技術擴增齣DEV-NP基因,剋隆至酵母雙雜交誘餌質粒pGBKT7中,以PCR檢測、限製性酶切和序列測定等方法進行鑒定;然後採用PEG/LiA.法將暘性質粒pGBKT7-NP轉化酵母Y2HGold,在不同營養缺失型培養基進行自激活檢測,結果顯示,經PCR檢測和EcoR I/BamH I雙酶切,可見到與預期相一緻的目的片段;測序錶明該片段含DEV NP基因全部序列;轉化Y2HGold酵母菌後,在SD/-Trp/X-a-Gal 固體培養基上長齣藍色菌落,而在SD/-Trp/X-a-GaUAbA固體培養基上未見有菌落生長.無自激活作用的誘餌載體pGBKT7NP的成功構建,為DEV NP宿主結閤蛋白的篩選莫定瞭基礎.
위구건압장염병독(DEV)핵의각단백(NP)기인효모쌍잡교유이재체,채용PCR기술확증출DEV-NP기인,극륭지효모쌍잡교유이질립pGBKT7중,이PCR검측、한제성매절화서렬측정등방법진행감정;연후채용PEG/LiA.법장양성질립pGBKT7-NP전화효모Y2HGold,재불동영양결실형배양기진행자격활검측,결과현시,경PCR검측화EcoR I/BamH I쌍매절,가견도여예기상일치적목적편단;측서표명해편단함DEV NP기인전부서렬;전화Y2HGold효모균후,재SD/-Trp/X-a-Gal 고체배양기상장출람색균락,이재SD/-Trp/X-a-GaUAbA고체배양기상미견유균락생장.무자격활작용적유이재체pGBKT7NP적성공구건,위DEV NP숙주결합단백적사선막정료기출.
