CAJ | 학술논문

目的:比较自体血清与胎牛血清体外培养大鼠关节软骨细胞生物学行为的差异.方法:分离培养雄性8周Sprague-Dawley(SD)大鼠软骨细胞,分别在5%、10%自体血清和10%胎牛血清中进行单层传代培养,采用光镜观察细胞形态变化,绘制生长曲线评估细胞增殖速度,通过甲苯胺蓝染色,Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色以及流式细胞仪分析细胞CD26、CD44及Ⅰ、Ⅱ型胶原表达以检测软骨细胞生物学行为的变化.结果:(1)在培养3代内,原代培养的软骨细胞形态呈多角形,而3代培养的细胞都为梭形,三组无明显差别;(2)5%自体血清培养的细胞的生长速度与10%胎牛血清培养的细胞接近,10%自体血清培养的软骨细胞的生长速度快于前两组;(3)甲苯胺蓝染色结果证明三组细胞均随传代数增加酸性粘多糖蛋白分泌量下降,且10%胎牛血清组比10%和5%自体血清培养组下降更明显,而10%与5%自体血清培养组之间无明显差异;(4)免疫组化染色和流式细胞仪检测结果表明10%与5%自体血清培养的软骨细胞Ⅱ型胶原表达高于10%胎牛血清培养的细胞(P＜0.05),10%与5%自体血清组无显著性差异(P＞0.05):随体外培养时间延长,三组细胞合成的Ⅱ型胶原均逐渐减少,Ⅰ型胶原表达逐渐增多.(5)流式细胞仪观察显示三组CD26表达虽有增加但无显著性差异,CD44表达均随传代数增加而逐渐增加,且在1、3代细胞之间具有显著性差异(P＜0.05).在3种培养条件下,相同代数的软骨细胞CD26和CD44表达无显著性差异.结论:本研究发现10%自体血清培养大鼠软骨细胞生长速度快,且仍可以较好保持细胞表型,推测在可能条件下使用浓度较高的自体血清可以缩短体外培养时间而达到较多细胞保持表型的目的.
목적:비교자체혈청여태우혈청체외배양대서관절연골세포생물학행위적차이.방법:분리배양웅성8주Sprague-Dawley(SD)대서연골세포,분별재5%、10%자체혈청화10%태우혈청중진행단층전대배양,채용광경관찰세포형태변화,회제생장곡선평고세포증식속도,통과갑분알람염색,Ⅰ、Ⅱ형효원면역조직화학염색이급류식세포의분석세포CD26、CD44급Ⅰ、Ⅱ형효원표체이검측연골세포생물학행위적변화.결과:(1)재배양3대내,원대배양적연골세포형태정다각형,이3대배양적세포도위사형,삼조무명현차별;(2)5%자체혈청배양적세포적생장속도여10%태우혈청배양적세포접근,10%자체혈청배양적연골세포적생장속도쾌우전량조;(3)갑분알람염색결과증명삼조세포균수전대수증가산성점다당단백분비량하강,차10%태우혈청조비10%화5%자체혈청배양조하강경명현,이10%여5%자체혈청배양조지간무명현차이;(4)면역조화염색화류식세포의검측결과표명10%여5%자체혈청배양적연골세포Ⅱ형효원표체고우10%태우혈청배양적세포(P＜0.05),10%여5%자체혈청조무현저성차이(P＞0.05):수체외배양시간연장,삼조세포합성적Ⅱ형효원균축점감소,Ⅰ형효원표체축점증다.(5)류식세포의관찰현시삼조CD26표체수유증가단무현저성차이,CD44표체균수전대수증가이축점증가,차재1、3대세포지간구유현저성차이(P＜0.05).재3충배양조건하,상동대수적연골세포CD26화CD44표체무현저성차이.결론:본연구발현10%자체혈청배양대서연골세포생장속도쾌,차잉가이교호보지세포표형,추측재가능조건하사용농도교고적자체혈청가이축단체외배양시간이체도교다세포보지표형적목적.