农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2012年
6期
599-605
,共7页
杨浩%李新建%程佳%宋子仪%史新娥%张振宇%蒲蕾%杨公社
楊浩%李新建%程佳%宋子儀%史新娥%張振宇%蒲蕾%楊公社
양호%리신건%정가%송자의%사신아%장진우%포뢰%양공사
颗粒体蛋白前体(GRN)%RNA干扰%慢病毒%前体脂肪细胞%猪
顆粒體蛋白前體(GRN)%RNA榦擾%慢病毒%前體脂肪細胞%豬
과립체단백전체(GRN)%RNA간우%만병독%전체지방세포%저
为研究颗粒体蛋白前体(granulin,GRN)在脂肪细胞发育过程中的作用,本实验构建了GRN短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒干扰载体,包装并感染猪前体脂肪细胞,采用油红O染色、油红O提取比色法检测猪前体脂肪细胞分化情况,采用Real-time PCR法检测成脂关键基因mRNA的表达变化情况.结果显示,GRN慢病毒干扰载体病毒滴度在5×107 TU/mL以上,病毒感染前体脂肪细胞后显著降低了GRN的表达,shRNA2干扰效率最高,达到76％,沉默GRN后能够促进猪前体脂肪细胞分化；脂肪细胞分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节原件结合蛋白(SREBP-1c)、脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(ap2)和脂蛋白酯酶(LPL)基因mRNA表达量均升高.结果表明,降低GRN基因表达促进了猪前体脂肪细胞分化,揭示GRN在猪前体脂肪细胞分化过程中可能起到抑制作用.
為研究顆粒體蛋白前體(granulin,GRN)在脂肪細胞髮育過程中的作用,本實驗構建瞭GRN短髮夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒榦擾載體,包裝併感染豬前體脂肪細胞,採用油紅O染色、油紅O提取比色法檢測豬前體脂肪細胞分化情況,採用Real-time PCR法檢測成脂關鍵基因mRNA的錶達變化情況.結果顯示,GRN慢病毒榦擾載體病毒滴度在5×107 TU/mL以上,病毒感染前體脂肪細胞後顯著降低瞭GRN的錶達,shRNA2榦擾效率最高,達到76％,沉默GRN後能夠促進豬前體脂肪細胞分化；脂肪細胞分化標誌基因過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、固醇調節原件結閤蛋白(SREBP-1c)、脂肪細胞型脂肪痠結閤蛋白(ap2)和脂蛋白酯酶(LPL)基因mRNA錶達量均升高.結果錶明,降低GRN基因錶達促進瞭豬前體脂肪細胞分化,揭示GRN在豬前體脂肪細胞分化過程中可能起到抑製作用.
위연구과립체단백전체(granulin,GRN)재지방세포발육과정중적작용,본실험구건료GRN단발협RNA(short hairpin RNA,shRNA)만병독간우재체,포장병감염저전체지방세포,채용유홍O염색、유홍O제취비색법검측저전체지방세포분화정황,채용Real-time PCR법검측성지관건기인mRNA적표체변화정황.결과현시,GRN만병독간우재체병독적도재5×107 TU/mL이상,병독감염전체지방세포후현저강저료GRN적표체,shRNA2간우효솔최고,체도76％,침묵GRN후능구촉진저전체지방세포분화；지방세포분화표지기인과양화물매체증식물격활수체γ(PPARγ)、고순조절원건결합단백(SREBP-1c)、지방세포형지방산결합단백(ap2)화지단백지매(LPL)기인mRNA표체량균승고.결과표명,강저GRN기인표체촉진료저전체지방세포분화,게시GRN재저전체지방세포분화과정중가능기도억제작용.
