CAJ | 학술논문

目的探讨核定位信号肽(NLS)在转人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因小鼠制备中的作用.方法将受精卵随机分为3组,采用显微注射的方法制备转基因小鼠.实验组:将NLS转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质;对照Ⅰ组:将人HT转基因构件导入细胞质;对照Ⅱ组:将人HT转基因构件导入细胞核.应用聚合酶链反应(PCR)、Southern杂交及逆转录(RT)-PCR等方法检测人HT基因在G0代小鼠体内的整合与表达,应用流式细胞计数(FCM)检测转基因小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面H抗原与α-Gal抗原的表达.结果实验组与对照Ⅰ组G0代小鼠的出生率33.8%(46/136)及35.4%(23/65)高于对照Ⅱ组10.2%(51/498)(P＜0.01),实验组人HT基因的整合率(30.4%,14/46)高于对照Ⅰ组(0,0/23)与对照Ⅱ组(11.8%,6/51,P＜0.01),实验组人HT基因的表达率(19.6%,9/46)也高于对照Ⅰ组(0,0/23)和对照Ⅱ组(5.9%,3/51,P＜0.01),人HT mRNA在小鼠心、肝、肾和骨骼肌组织中均表达阳性.转基因小鼠PBMCs表面H抗原表达阳性,表达强度为人的85%～190%,同时α-Gal抗原表达显著降低,为正常小鼠的5%～12%.转基因小鼠已经稳定传3代.结论NLS基因与目的基因细胞质共注射是制备转基因小鼠简便实用的新方法.
목적탐토핵정위신호태(NLS)재전인α1,2-암조당감전이매(HT)기인소서제비중적작용.방법장수정란수궤분위3조,채용현미주사적방법제비전기인소서.실험조:장NLS전기인구건여인HT전기인구건동시도입세포질;대조Ⅰ조:장인HT전기인구건도입세포질;대조Ⅱ조:장인HT전기인구건도입세포핵.응용취합매련반응(PCR)、Southern잡교급역전록(RT)-PCR등방법검측인HT기인재G0대소서체내적정합여표체,응용류식세포계수(FCM)검측전기인소서외주혈단핵세포(PBMCs)표면H항원여α-Gal항원적표체.결과실험조여대조Ⅰ조G0대소서적출생솔33.8%(46/136)급35.4%(23/65)고우대조Ⅱ조10.2%(51/498)(P＜0.01),실험조인HT기인적정합솔(30.4%,14/46)고우대조Ⅰ조(0,0/23)여대조Ⅱ조(11.8%,6/51,P＜0.01),실험조인HT기인적표체솔(19.6%,9/46)야고우대조Ⅰ조(0,0/23)화대조Ⅱ조(5.9%,3/51,P＜0.01),인HT mRNA재소서심、간、신화골격기조직중균표체양성.전기인소서PBMCs표면H항원표체양성,표체강도위인적85%～190%,동시α-Gal항원표체현저강저,위정상소서적5%～12%.전기인소서이경은정전3대.결론NLS기인여목적기인세포질공주사시제비전기인소서간편실용적신방법.