中华眼科杂志
中華眼科雜誌
중화안과잡지
Chinese Journal of Ophthalmology
2007年
6期
493-498
,共6页
贾仁兵%范先群%王晓莉%张兴黔%张萍%卢健
賈仁兵%範先群%王曉莉%張興黔%張萍%盧健
가인병%범선군%왕효리%장흥검%장평%로건
视网膜母细胞瘤%血管内皮生长因子A%RNA干扰%基因疗法
視網膜母細胞瘤%血管內皮生長因子A%RNA榦擾%基因療法
시망막모세포류%혈관내피생장인자A%RNA간우%기인요법
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)短发夹RNA(shRNA)表达质粒稳定转染对视网膜母细胞瘤(RB)细胞中VEGF表达的作用.方法 构建VEGF shRNA表达质粒p4.1CMV-VEGF shRNA,以脂质体介导其转染两种RB细胞系SO-RB50和HXO-RB44,新霉素筛选结合梯度稀释法获得p4.1CMV-VEGF shRNA阳性RB细胞单克隆,继续培养扩增建立p4.1CMV-VEGF shRNA阳性RB细胞,用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测RB细胞中VEGF基因的表达,并用酶联免疫吸附(ELISA)法检测RB细胞上清中VEGF蛋白的表达;以与哺乳动物基因组无同源性的shRNA表达质粒p4.1CMV-Neg shRNA作为阴性对照,同时以未做任何处理组作为空白对照.结果 成功构建p4.1CMV-VEGF shRNA并获得其表达阳性的RB细胞克隆.阴性对照组和空白对照组SO-RB50细胞的VEGF基因表达量分别为实验组的5.02倍和6.32倍;阴性对照组和空白对照组HXO-RB44细胞分别为实验组的5.70倍和4.86倍.实验组SO-RB50细胞上清中,VEGF蛋白浓度为(187.69±83.89)μg/L,显著低于阴性对照组(822.98±187.98)μg/L和空白对照组(865.76±170.33)μg/L,差异有统计学意义(均P＜0.01);实验组HXO-RB44细胞上清中,VEGF蛋白浓度为(162.20±66.33)μg/L,与阴性对照组(764.33±164.79)μg/L和空白对照组(828.22±145.94)μg/L比较,差异也有统计学意义(均P＜0.01).结论 VEGF shRNA表达质粒稳定转染可高效抑制RB细胞中VEGF的表达,靶向VEGF的RNA干扰可作为拮抗VEGF并治疗RB的有效手段.
目的 探討血管內皮生長因子(VEGF)短髮夾RNA(shRNA)錶達質粒穩定轉染對視網膜母細胞瘤(RB)細胞中VEGF錶達的作用.方法 構建VEGF shRNA錶達質粒p4.1CMV-VEGF shRNA,以脂質體介導其轉染兩種RB細胞繫SO-RB50和HXO-RB44,新黴素篩選結閤梯度稀釋法穫得p4.1CMV-VEGF shRNA暘性RB細胞單剋隆,繼續培養擴增建立p4.1CMV-VEGF shRNA暘性RB細胞,用熒光定量聚閤酶鏈反應(PCR)法檢測RB細胞中VEGF基因的錶達,併用酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測RB細胞上清中VEGF蛋白的錶達;以與哺乳動物基因組無同源性的shRNA錶達質粒p4.1CMV-Neg shRNA作為陰性對照,同時以未做任何處理組作為空白對照.結果 成功構建p4.1CMV-VEGF shRNA併穫得其錶達暘性的RB細胞剋隆.陰性對照組和空白對照組SO-RB50細胞的VEGF基因錶達量分彆為實驗組的5.02倍和6.32倍;陰性對照組和空白對照組HXO-RB44細胞分彆為實驗組的5.70倍和4.86倍.實驗組SO-RB50細胞上清中,VEGF蛋白濃度為(187.69±83.89)μg/L,顯著低于陰性對照組(822.98±187.98)μg/L和空白對照組(865.76±170.33)μg/L,差異有統計學意義(均P＜0.01);實驗組HXO-RB44細胞上清中,VEGF蛋白濃度為(162.20±66.33)μg/L,與陰性對照組(764.33±164.79)μg/L和空白對照組(828.22±145.94)μg/L比較,差異也有統計學意義(均P＜0.01).結論 VEGF shRNA錶達質粒穩定轉染可高效抑製RB細胞中VEGF的錶達,靶嚮VEGF的RNA榦擾可作為拮抗VEGF併治療RB的有效手段.
목적 탐토혈관내피생장인자(VEGF)단발협RNA(shRNA)표체질립은정전염대시망막모세포류(RB)세포중VEGF표체적작용.방법 구건VEGF shRNA표체질립p4.1CMV-VEGF shRNA,이지질체개도기전염량충RB세포계SO-RB50화HXO-RB44,신매소사선결합제도희석법획득p4.1CMV-VEGF shRNA양성RB세포단극륭,계속배양확증건립p4.1CMV-VEGF shRNA양성RB세포,용형광정량취합매련반응(PCR)법검측RB세포중VEGF기인적표체,병용매련면역흡부(ELISA)법검측RB세포상청중VEGF단백적표체;이여포유동물기인조무동원성적shRNA표체질립p4.1CMV-Neg shRNA작위음성대조,동시이미주임하처리조작위공백대조.결과 성공구건p4.1CMV-VEGF shRNA병획득기표체양성적RB세포극륭.음성대조조화공백대조조SO-RB50세포적VEGF기인표체량분별위실험조적5.02배화6.32배;음성대조조화공백대조조HXO-RB44세포분별위실험조적5.70배화4.86배.실험조SO-RB50세포상청중,VEGF단백농도위(187.69±83.89)μg/L,현저저우음성대조조(822.98±187.98)μg/L화공백대조조(865.76±170.33)μg/L,차이유통계학의의(균P＜0.01);실험조HXO-RB44세포상청중,VEGF단백농도위(162.20±66.33)μg/L,여음성대조조(764.33±164.79)μg/L화공백대조조(828.22±145.94)μg/L비교,차이야유통계학의의(균P＜0.01).결론 VEGF shRNA표체질립은정전염가고효억제RB세포중VEGF적표체,파향VEGF적RNA간우가작위길항VEGF병치료RB적유효수단.
