山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
11期
33-35
,共3页
张玉玲%栾英姿%苏占涛%郑燕%郏雁飞%汪运山
張玉玲%欒英姿%囌佔濤%鄭燕%郟雁飛%汪運山
장옥령%란영자%소점도%정연%겹안비%왕운산
质粒%甲胎蛋白%基因%表达
質粒%甲胎蛋白%基因%錶達
질립%갑태단백%기인%표체
目的 构建针对人甲胎蛋白(AFP)基因的miRNA表达质粒,为进一步研究AFP基因功能奠定基础.方法 沿mRNA序列寻找连续两个AA及后面的19个核苷酸,通过同源性比较,选择与其他任何基因无同源性的序列即作为潜在的miRNA靶位点,针对AFP基因的编码序列体外合成两段互补的寡核苷酸,与线性化的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR RNAi EXPRESSION VECTOR载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、PCR及基因测序鉴定其相对分子质量及插入片段的序列.结果 纯化质粒的相对分子质量为5.8 kb,PCR鉴定结果符合目的 条带(260 bp左右)大小,插人的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符.结论 成功构建了针对人AFP基因的miRRA表达质粒.
目的 構建針對人甲胎蛋白(AFP)基因的miRNA錶達質粒,為進一步研究AFP基因功能奠定基礎.方法 沿mRNA序列尋找連續兩箇AA及後麵的19箇覈苷痠,通過同源性比較,選擇與其他任何基因無同源性的序列即作為潛在的miRNA靶位點,針對AFP基因的編碼序列體外閤成兩段互補的寡覈苷痠,與線性化的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR RNAi EXPRESSION VECTOR載體連接後轉化大腸桿菌,擴增、純化穫得所需質粒,以瓊脂糖凝膠電泳、PCR及基因測序鑒定其相對分子質量及插入片段的序列.結果 純化質粒的相對分子質量為5.8 kb,PCR鑒定結果符閤目的 條帶(260 bp左右)大小,插人的寡覈苷痠序列與設計的序列完全相符.結論 成功構建瞭針對人AFP基因的miRRA錶達質粒.
목적 구건침대인갑태단백(AFP)기인적miRNA표체질립,위진일보연구AFP기인공능전정기출.방법 연mRNA서렬심조련속량개AA급후면적19개핵감산,통과동원성비교,선택여기타임하기인무동원성적서렬즉작위잠재적miRNA파위점,침대AFP기인적편마서렬체외합성량단호보적과핵감산,여선성화적pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR RNAi EXPRESSION VECTOR재체련접후전화대장간균,확증、순화획득소수질립,이경지당응효전영、PCR급기인측서감정기상대분자질량급삽입편단적서렬.결과 순화질립적상대분자질량위5.8 kb,PCR감정결과부합목적 조대(260 bp좌우)대소,삽인적과핵감산서렬여설계적서렬완전상부.결론 성공구건료침대인AFP기인적miRRA표체질립.
