肾脏病与透析肾移植杂志
腎髒病與透析腎移植雜誌
신장병여투석신이식잡지
CHINESE JOURNAL OF NEPHROLOGY,DIALYSIS & TRANSPLANTATION
2009年
4期
310-317
,共8页
陈朝红%刘志红%洪亦眉%秦卫松%张明超%曾彩虹%黎磊石
陳朝紅%劉誌紅%洪亦眉%秦衛鬆%張明超%曾綵虹%黎磊石
진조홍%류지홍%홍역미%진위송%장명초%증채홍%려뢰석
雷公藤甲素%膜性肾病%膜攻击复合物%蛋白尿%足细胞
雷公籐甲素%膜性腎病%膜攻擊複閤物%蛋白尿%足細胞
뢰공등갑소%막성신병%막공격복합물%단백뇨%족세포
目的:体外观察雷公藤甲素对膜攻击复合物C5b-9介导的足细胞损伤的影响,探讨雷公藤甲素治疗膜性肾病的疗效机制. 方法:以纯化的C5b6及C7～C9体外组装C5b-9,建立足细胞亚溶破模型.免疫荧光染色分析C5b-9对足细胞骨架相关蛋白F-actin表达和分布的影响;在观察雷公藤甲素对C5b-9导致的足细胞损伤的治疗机制研究中,免疫荧光观察和流式细胞仪定量分析雷公藤甲素对C5b-9在足细胞膜上组装和活性的影响.并进一步在C5b-9组装完成后加入雷公藤甲素,观察雷公藤甲素对C5b-9诱导的足细胞内活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.流式细胞仪分析荧光探针CM-H2DCFDA标记的细胞内ROS,MAPK信号通路的活性采用Western blot检测p-38,ERK 1/2和JNK MAPK磷酸化水平,以及MAPK信号通路选择性阻断剂SB202190,U0126和SP600125对C5b-9作用的影响. 结果:免疫荧光和LDH释放试验显示C5b-9在足细胞膜组装成功,亚溶解剂量C5b-9对足细胞膜完整性没有明显影响,但可呈时间依赖性的破坏足细胞骨架结构,表现为细胞骨架的极性消失,排列紊乱,部分足细胞F-actin的丝状结构完全消失.C5b-9可诱导足细胞内ROS的明显增加,激活p-38 MAPK信号通路,但C5b-9对ERK MAPK和JNK MAPK信号通路没有明显的影响.抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、p-38 MAPK通路特异性抑制剂SB202190均能够拮抗C5b-9对足细胞的损伤,而ERK MAPK和JNK MAPK通路抑制剂U0126和sp600125对C5b-9诱导的足细胞损伤没有明显的保护作用.雷公藤甲素(10ng/ml)对C5b-9复合物在足细胞膜上组装量和活性没有明显的影响.当C5b-9在足细胞膜上组装完成后加入雷公藤甲素,雷公藤甲素对C5b-9诱导的细胞内ROS的产生没有明显的抑制作用,但能够有效遏制p-38 MAPK信号通路的活化,p-38 MAPK的磷酸化水平显著降低. 结论:雷公藤甲素的疗效机制除了免疫抑制和抗炎作用外,还可通过抑制C5b-9激活的细胞内p-38 MAPK信号通路发挥直接的足细胞保护作用.雷公藤甲素对足细胞的上述作用可能部分参与了其对膜性肾病的疗效.
目的:體外觀察雷公籐甲素對膜攻擊複閤物C5b-9介導的足細胞損傷的影響,探討雷公籐甲素治療膜性腎病的療效機製. 方法:以純化的C5b6及C7～C9體外組裝C5b-9,建立足細胞亞溶破模型.免疫熒光染色分析C5b-9對足細胞骨架相關蛋白F-actin錶達和分佈的影響;在觀察雷公籐甲素對C5b-9導緻的足細胞損傷的治療機製研究中,免疫熒光觀察和流式細胞儀定量分析雷公籐甲素對C5b-9在足細胞膜上組裝和活性的影響.併進一步在C5b-9組裝完成後加入雷公籐甲素,觀察雷公籐甲素對C5b-9誘導的足細胞內活性氧(ROS)和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路的影響.流式細胞儀分析熒光探針CM-H2DCFDA標記的細胞內ROS,MAPK信號通路的活性採用Western blot檢測p-38,ERK 1/2和JNK MAPK燐痠化水平,以及MAPK信號通路選擇性阻斷劑SB202190,U0126和SP600125對C5b-9作用的影響. 結果:免疫熒光和LDH釋放試驗顯示C5b-9在足細胞膜組裝成功,亞溶解劑量C5b-9對足細胞膜完整性沒有明顯影響,但可呈時間依賴性的破壞足細胞骨架結構,錶現為細胞骨架的極性消失,排列紊亂,部分足細胞F-actin的絲狀結構完全消失.C5b-9可誘導足細胞內ROS的明顯增加,激活p-38 MAPK信號通路,但C5b-9對ERK MAPK和JNK MAPK信號通路沒有明顯的影響.抗氧化劑N-乙酰半胱氨痠(NAC)、p-38 MAPK通路特異性抑製劑SB202190均能夠拮抗C5b-9對足細胞的損傷,而ERK MAPK和JNK MAPK通路抑製劑U0126和sp600125對C5b-9誘導的足細胞損傷沒有明顯的保護作用.雷公籐甲素(10ng/ml)對C5b-9複閤物在足細胞膜上組裝量和活性沒有明顯的影響.噹C5b-9在足細胞膜上組裝完成後加入雷公籐甲素,雷公籐甲素對C5b-9誘導的細胞內ROS的產生沒有明顯的抑製作用,但能夠有效遏製p-38 MAPK信號通路的活化,p-38 MAPK的燐痠化水平顯著降低. 結論:雷公籐甲素的療效機製除瞭免疫抑製和抗炎作用外,還可通過抑製C5b-9激活的細胞內p-38 MAPK信號通路髮揮直接的足細胞保護作用.雷公籐甲素對足細胞的上述作用可能部分參與瞭其對膜性腎病的療效.
목적:체외관찰뢰공등갑소대막공격복합물C5b-9개도적족세포손상적영향,탐토뢰공등갑소치료막성신병적료효궤제. 방법:이순화적C5b6급C7～C9체외조장C5b-9,건립족세포아용파모형.면역형광염색분석C5b-9대족세포골가상관단백F-actin표체화분포적영향;재관찰뢰공등갑소대C5b-9도치적족세포손상적치료궤제연구중,면역형광관찰화류식세포의정량분석뢰공등갑소대C5b-9재족세포막상조장화활성적영향.병진일보재C5b-9조장완성후가입뢰공등갑소,관찰뢰공등갑소대C5b-9유도적족세포내활성양(ROS)화사렬원활화단백격매(MAPK)신호통로적영향.류식세포의분석형광탐침CM-H2DCFDA표기적세포내ROS,MAPK신호통로적활성채용Western blot검측p-38,ERK 1/2화JNK MAPK린산화수평,이급MAPK신호통로선택성조단제SB202190,U0126화SP600125대C5b-9작용적영향. 결과:면역형광화LDH석방시험현시C5b-9재족세포막조장성공,아용해제량C5b-9대족세포막완정성몰유명현영향,단가정시간의뢰성적파배족세포골가결구,표현위세포골가적겁성소실,배렬문란,부분족세포F-actin적사상결구완전소실.C5b-9가유도족세포내ROS적명현증가,격활p-38 MAPK신호통로,단C5b-9대ERK MAPK화JNK MAPK신호통로몰유명현적영향.항양화제N-을선반광안산(NAC)、p-38 MAPK통로특이성억제제SB202190균능구길항C5b-9대족세포적손상,이ERK MAPK화JNK MAPK통로억제제U0126화sp600125대C5b-9유도적족세포손상몰유명현적보호작용.뢰공등갑소(10ng/ml)대C5b-9복합물재족세포막상조장량화활성몰유명현적영향.당C5b-9재족세포막상조장완성후가입뢰공등갑소,뢰공등갑소대C5b-9유도적세포내ROS적산생몰유명현적억제작용,단능구유효알제p-38 MAPK신호통로적활화,p-38 MAPK적린산화수평현저강저. 결론:뢰공등갑소적료효궤제제료면역억제화항염작용외,환가통과억제C5b-9격활적세포내p-38 MAPK신호통로발휘직접적족세포보호작용.뢰공등갑소대족세포적상술작용가능부분삼여료기대막성신병적료효.
