浙江理工大学学报
浙江理工大學學報
절강리공대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
2010年
4期
620-624,640
,共6页
家蚕%BmDDRGK基因%克隆%序列分析%实时定量PCR
傢蠶%BmDDRGK基因%剋隆%序列分析%實時定量PCR
가잠%BmDDRGK기인%극륭%서렬분석%실시정량PCR
DDRGK类蛋白是在动物及植物中发现的约有300个氨基酸残基的蛋白家族,含有一个高度保守的DDRGK基序,但功能还未知.在对家蚕幼虫cDNA文库的测序中发现了含有该保守结构域的EST序列,经过电子克隆、RT-PCR,获得该基因完整的cDNA序列,将其命名BmDDRGK(GenBank登录号FJ645927).然后构建了重组质粒转化到大肠杆菌BL21和Rosetta中诱导表达,但经SDS-PAGE检测未检测到重组蛋白的表达.利用Real-time PCR技术对BmDDRGK在家蚕五龄幼虫期和蛹期不同组织的mRNA表达水平进行了鉴定.绝对定量结果显示BmDDRGK在家蚕五龄幼虫期和蛹期的各个组织中均有较为明显的表达,在五龄幼虫期,以中肠、马氏管、睾丸表达量较高,在蛹期,以翅原基、睾丸的表达量较高.
DDRGK類蛋白是在動物及植物中髮現的約有300箇氨基痠殘基的蛋白傢族,含有一箇高度保守的DDRGK基序,但功能還未知.在對傢蠶幼蟲cDNA文庫的測序中髮現瞭含有該保守結構域的EST序列,經過電子剋隆、RT-PCR,穫得該基因完整的cDNA序列,將其命名BmDDRGK(GenBank登錄號FJ645927).然後構建瞭重組質粒轉化到大腸桿菌BL21和Rosetta中誘導錶達,但經SDS-PAGE檢測未檢測到重組蛋白的錶達.利用Real-time PCR技術對BmDDRGK在傢蠶五齡幼蟲期和蛹期不同組織的mRNA錶達水平進行瞭鑒定.絕對定量結果顯示BmDDRGK在傢蠶五齡幼蟲期和蛹期的各箇組織中均有較為明顯的錶達,在五齡幼蟲期,以中腸、馬氏管、睪汍錶達量較高,在蛹期,以翅原基、睪汍的錶達量較高.
DDRGK류단백시재동물급식물중발현적약유300개안기산잔기적단백가족,함유일개고도보수적DDRGK기서,단공능환미지.재대가잠유충cDNA문고적측서중발현료함유해보수결구역적EST서렬,경과전자극륭、RT-PCR,획득해기인완정적cDNA서렬,장기명명BmDDRGK(GenBank등록호FJ645927).연후구건료중조질립전화도대장간균BL21화Rosetta중유도표체,단경SDS-PAGE검측미검측도중조단백적표체.이용Real-time PCR기술대BmDDRGK재가잠오령유충기화용기불동조직적mRNA표체수평진행료감정.절대정량결과현시BmDDRGK재가잠오령유충기화용기적각개조직중균유교위명현적표체,재오령유충기,이중장、마씨관、고환표체량교고,재용기,이시원기、고환적표체량교고.
