生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
4期
497-500
,共4页
曹赛%戴红梅%李树龙%谢迟%方宏清
曹賽%戴紅梅%李樹龍%謝遲%方宏清
조새%대홍매%리수룡%사지%방굉청
Spl DnaX内含肤%胸腺肤αl%融合蛋白%切割
Spl DnaX內含膚%胸腺膚αl%融閤蛋白%切割
Spl DnaX내함부%흉선부αl%융합단백%절할
目的:研究胸腺肤α1(Tal)与Spl DnaX内含肤融合蛋白AS的体外切割动力学.方法:构建Tαl和SplDnaX内含肤的融合表达载体pET-AS,转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导获得可溶性表达的融合蛋白AS,用镍亲和层析纯化该蛋白;综合评价温度、β-巯基乙醇(β-ME)浓度和诱导切割时间对Spl DnaX内含肤介导融合蛋白AS自切割释放Tα1的影响.结果:在大肠杆菌中诱导表达了融合蛋白AS,经镍柱纯化获得该蛋白;随着温度升高和β-ME浓度增加,诱导切割时间延长,Spl DnaX内含肤介导的切割率逐渐增大;最终采用300mmol/L β-ME切割24 h,融合蛋白的硫解切割率大于90%.结论:通过对Spl DnaX内含肤的诱导切割条件进行摸索,确定了最适宜的切割条件,为利用该方法制备Tαl和其他小分子多肤提供了技术基础.
目的:研究胸腺膚α1(Tal)與Spl DnaX內含膚融閤蛋白AS的體外切割動力學.方法:構建Tαl和SplDnaX內含膚的融閤錶達載體pET-AS,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經乳糖誘導穫得可溶性錶達的融閤蛋白AS,用鎳親和層析純化該蛋白;綜閤評價溫度、β-巰基乙醇(β-ME)濃度和誘導切割時間對Spl DnaX內含膚介導融閤蛋白AS自切割釋放Tα1的影響.結果:在大腸桿菌中誘導錶達瞭融閤蛋白AS,經鎳柱純化穫得該蛋白;隨著溫度升高和β-ME濃度增加,誘導切割時間延長,Spl DnaX內含膚介導的切割率逐漸增大;最終採用300mmol/L β-ME切割24 h,融閤蛋白的硫解切割率大于90%.結論:通過對Spl DnaX內含膚的誘導切割條件進行摸索,確定瞭最適宜的切割條件,為利用該方法製備Tαl和其他小分子多膚提供瞭技術基礎.
목적:연구흉선부α1(Tal)여Spl DnaX내함부융합단백AS적체외절할동역학.방법:구건Tαl화SplDnaX내함부적융합표체재체pET-AS,전화대장간균BL21(DE3),경유당유도획득가용성표체적융합단백AS,용얼친화층석순화해단백;종합평개온도、β-구기을순(β-ME)농도화유도절할시간대Spl DnaX내함부개도융합단백AS자절할석방Tα1적영향.결과:재대장간균중유도표체료융합단백AS,경얼주순화획득해단백;수착온도승고화β-ME농도증가,유도절할시간연장,Spl DnaX내함부개도적절할솔축점증대;최종채용300mmol/L β-ME절할24 h,융합단백적류해절할솔대우90%.결론:통과대Spl DnaX내함부적유도절할조건진행모색,학정료최괄의적절할조건,위이용해방법제비Tαl화기타소분자다부제공료기술기출.
