南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
11期
1830-1834
,共5页
李忠玉%吴移谋%黄秋林%粟盛梅%周洲%陈超群%钟光明
李忠玉%吳移謀%黃鞦林%粟盛梅%週洲%陳超群%鐘光明
리충옥%오이모%황추림%속성매%주주%진초군%종광명
沙眼衣原体%pORF8质粒蛋白%基因克隆%定位
沙眼衣原體%pORF8質粒蛋白%基因剋隆%定位
사안의원체%pORF8질립단백%기인극륭%정위
目的 克隆表达沙眼衣原体pORF8质粒蛋白,并在衣原体感染细胞中对其进行定位分析.方法 PCR法扩增pORF8基因,并将其定向插入pGEX-6p载体构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF8,重组体转化E.coli XL1Blue后经IPTG诱导表达pORF8融合蛋白,融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫Balb/C鼠,制备pORF8多克隆抗体；应用免疫荧光试验对pORF8质粒蛋白进行定位.结果 pORF8基因全长为744 bp,编码247个氨基酸残基,pGEX-6p/pORF8在大肠杆菌中表达相对分子质量约为54 000的GST-pORF8融合蛋白,间接免疫荧光实验结果显示pORF8在感染细胞中的表达模式与主要外膜蛋白基本一致,而与衣原体蛋白酶样活性因子分布模式不同.结论pORF8质粒蛋白定位于衣原体菌体上,为衣原体菌体蛋白.该研究为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制奠定了基础.
目的 剋隆錶達沙眼衣原體pORF8質粒蛋白,併在衣原體感染細胞中對其進行定位分析.方法 PCR法擴增pORF8基因,併將其定嚮插入pGEX-6p載體構建原覈錶達重組體pGEX-6p/pORF8,重組體轉化E.coli XL1Blue後經IPTG誘導錶達pORF8融閤蛋白,融閤蛋白經Glutathione Sepharose親和層析純化後免疫Balb/C鼠,製備pORF8多剋隆抗體；應用免疫熒光試驗對pORF8質粒蛋白進行定位.結果 pORF8基因全長為744 bp,編碼247箇氨基痠殘基,pGEX-6p/pORF8在大腸桿菌中錶達相對分子質量約為54 000的GST-pORF8融閤蛋白,間接免疫熒光實驗結果顯示pORF8在感染細胞中的錶達模式與主要外膜蛋白基本一緻,而與衣原體蛋白酶樣活性因子分佈模式不同.結論pORF8質粒蛋白定位于衣原體菌體上,為衣原體菌體蛋白.該研究為進一步研究該蛋白的結構功能、闡明Ct的緻病機製奠定瞭基礎.
목적 극륭표체사안의원체pORF8질립단백,병재의원체감염세포중대기진행정위분석.방법 PCR법확증pORF8기인,병장기정향삽입pGEX-6p재체구건원핵표체중조체pGEX-6p/pORF8,중조체전화E.coli XL1Blue후경IPTG유도표체pORF8융합단백,융합단백경Glutathione Sepharose친화층석순화후면역Balb/C서,제비pORF8다극륭항체；응용면역형광시험대pORF8질립단백진행정위.결과 pORF8기인전장위744 bp,편마247개안기산잔기,pGEX-6p/pORF8재대장간균중표체상대분자질량약위54 000적GST-pORF8융합단백,간접면역형광실험결과현시pORF8재감염세포중적표체모식여주요외막단백기본일치,이여의원체단백매양활성인자분포모식불동.결론pORF8질립단백정위우의원체균체상,위의원체균체단백.해연구위진일보연구해단백적결구공능、천명Ct적치병궤제전정료기출.
