吉林大学学报（理学版）
吉林大學學報（理學版）
길림대학학보（이학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(SCIENCE EDITION)
2011年
6期
1150-1156
,共7页
田海山%唐禄%王晓杰%王艳芳%官丽莉%李校堃
田海山%唐祿%王曉傑%王豔芳%官麗莉%李校堃
전해산%당록%왕효걸%왕염방%관려리%리교곤
重组角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)%高密度培养%柱层析%转受体FGFR2-Ⅲb%BaF3细胞株%生物活性
重組角質細胞生長因子-2(rhKGF-2)%高密度培養%柱層析%轉受體FGFR2-Ⅲb%BaF3細胞株%生物活性
중조각질세포생장인자-2(rhKGF-2)%고밀도배양%주층석%전수체FGFR2-Ⅲb%BaF3세포주%생물활성
从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物.结果表明:目的蛋白占菌体总蛋白的30.0%以上; 经阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获得的rhKGF-2纯度高于99.0%.建立了利用转受体FGFR2-Ⅲb的BaF3细胞株进行rhKGF-2促增殖作用的活性测定方法,活性测定结果呈典型的S型曲线,并在一定范围内具有剂量依赖性.
從人胚肺成纖維細胞中提取總RNA,利用RT-PCR法穫得人角質細胞生長因子-2(hKGF-2)cDNA,併通過PCR方法擴增,再與原覈錶達載體pET3c連接後轉化至BL21(DE3)宿主細胞中穫得錶達菌株.通過流加補料方式和髮酵條件的控製,進行高密度培養,併通過IPTG誘導穫得可溶性錶達的目的產物.結果錶明:目的蛋白佔菌體總蛋白的30.0%以上; 經暘離子交換層析、肝素親和層析兩步柱層析方法穫得的rhKGF-2純度高于99.0%.建立瞭利用轉受體FGFR2-Ⅲb的BaF3細胞株進行rhKGF-2促增殖作用的活性測定方法,活性測定結果呈典型的S型麯線,併在一定範圍內具有劑量依賴性.
종인배폐성섬유세포중제취총RNA,이용RT-PCR법획득인각질세포생장인자-2(hKGF-2)cDNA,병통과PCR방법확증,재여원핵표체재체pET3c련접후전화지BL21(DE3)숙주세포중획득표체균주.통과류가보료방식화발효조건적공제,진행고밀도배양,병통과IPTG유도획득가용성표체적목적산물.결과표명:목적단백점균체총단백적30.0%이상; 경양리자교환층석、간소친화층석량보주층석방법획득적rhKGF-2순도고우99.0%.건립료이용전수체FGFR2-Ⅲb적BaF3세포주진행rhKGF-2촉증식작용적활성측정방법,활성측정결과정전형적S형곡선,병재일정범위내구유제량의뢰성.
