CAJ | 학술논문

目的研究小分子干扰RNA (SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施.方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞.将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组.高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92％O2,5％CO2)中；空气组仍置于5％CO2培养箱中.4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA.采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C (CytC)mRNA的表达；Western-blot检测Trx-2蛋白表达；流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响.结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51％).与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P＜0.05).与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P＜0.05).与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P＜0.05).与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P＜0.05).干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P＜0.05).结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用.
목적 연구소분자간우RNA (SiRNA)억제고양폭로하인폐선암A549세포류양환단백-2(Trx-2)표체급기여폐세포대사화조망적관계,탐토고양폐손상적발병궤제화방치조시.방법 체외전대배양A549세포계,대기생장지접근아회합상태시,장체외화학합성Trx-2서렬특이성적SiRNA통과Lipofectamine2000전염A549세포.장세포수궤분위무간우공기조、무간우고양조、간우후공기조、간우후고양조4조.고양조지속폭로우상압고농도양(92％O2,5％CO2)중；공기조잉치우5％CO2배양상중.4조분별우고양혹공기폭로12、24、48 h제취A549세포총RNA.채용반정량RT-PCR측정Trx-2、삼린산선감합성매6,8(ATPase 6、8)급세포색소C (CytC)mRNA적표체；Western-blot검측Trx-2단백표체；류식세포술검측고양화침묵Trx-2대A549세포조망적영향.결과 서렬특이성SiRNA가억제Trx-2표체,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3조Trx-2단백표체균수도억제,SiRNA-1조억제효솔최고(79.51％).여무간우공기조상비,무간우고양조12 h CytC화24 h Trx-2 mRNA적표체증고,48 h CytC mRNA적표체강저(P＜0.05).여간우후공기조상비,간우후고양조24、48 h Trx-2 mRNA적표체감약,단재12、24 h CytC mRNA표체수평승고(P＜0.05).여무간우공기조상비,무간우고양조12、48 hATPase 6 mRNA적표체증고,24、48 h ATPase 8 mRNA적표체증고(P＜0.05).여간우후공기조상비,간우후고양조24、48 h ATPase 6,8 mRNA적표체감약(P＜0.05).간우후고양조24、48 h A549세포조망백분수명현고우간우후공기조(P＜0.05).결론 고양폭로화침묵Trx-2도치A549세포ATPase 6,8표체하조화CytC표체승고,표명능량대사장애화세포조망삼여고양폐손상발병과정,Trx-2대고양폐손상선립체기중요적보호작용.