中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2012年
5期
413-417
,共5页
陈玉英%王海东%王占祥%谭国伟%刘希尧%沈上杭
陳玉英%王海東%王佔祥%譚國偉%劉希堯%瀋上杭
진옥영%왕해동%왕점상%담국위%류희요%침상항
Pygo2%胶质瘤%细胞增殖%cyclinD1
Pygo2%膠質瘤%細胞增殖%cyclinD1
Pygo2%효질류%세포증식%cyclinD1
目的 通过构建过表达Pygo2的重组体上调Pygo2表达,探讨其在大鼠胶质瘤C6细胞增殖中的作用及机制.方法 重组体经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染大鼠胶质瘤C6细胞,采用Western blot检测外源pygo2蛋白表达,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测过表达Pygo2对C6细胞中cyclinD1、β-catenin水平的影响,并采用细胞免疫荧光法检测其对C6细胞中cyclinD1、β-catenin亚细胞定位的影响.结果 双酶切和测序鉴定结果证实插入序列正确,重组体能有效上调Pygo2表达.将重组体转染C6细胞上调Pygo2表达后,细胞的生长增殖被显著促进,克隆形成显著增多,细胞周期进程从G1期至S期转变显著增强；且cyclinD1水平随之增高,亚定位无改变,β-catenin水平和亚细胞定位无明显改变.结论 成功构建了过表达Pygo2的重组体,过表达Pygo2通过增高cyclinD1水平,促进细胞从G1期进入S期,从而促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖.
目的 通過構建過錶達Pygo2的重組體上調Pygo2錶達,探討其在大鼠膠質瘤C6細胞增殖中的作用及機製.方法 重組體經EcoRⅠ和HindⅢ雙酶切鑒定和DNA測序後,用脂質體2000將其轉染大鼠膠質瘤C6細胞,採用Western blot檢測外源pygo2蛋白錶達,應用剋隆形成實驗和MTT法檢測細胞增殖,流式細胞術檢測細胞週期,採用Western blot檢測過錶達Pygo2對C6細胞中cyclinD1、β-catenin水平的影響,併採用細胞免疫熒光法檢測其對C6細胞中cyclinD1、β-catenin亞細胞定位的影響.結果 雙酶切和測序鑒定結果證實插入序列正確,重組體能有效上調Pygo2錶達.將重組體轉染C6細胞上調Pygo2錶達後,細胞的生長增殖被顯著促進,剋隆形成顯著增多,細胞週期進程從G1期至S期轉變顯著增彊；且cyclinD1水平隨之增高,亞定位無改變,β-catenin水平和亞細胞定位無明顯改變.結論 成功構建瞭過錶達Pygo2的重組體,過錶達Pygo2通過增高cyclinD1水平,促進細胞從G1期進入S期,從而促進大鼠膠質瘤C6細胞增殖.
목적 통과구건과표체Pygo2적중조체상조Pygo2표체,탐토기재대서효질류C6세포증식중적작용급궤제.방법 중조체경EcoRⅠ화HindⅢ쌍매절감정화DNA측서후,용지질체2000장기전염대서효질류C6세포,채용Western blot검측외원pygo2단백표체,응용극륭형성실험화MTT법검측세포증식,류식세포술검측세포주기,채용Western blot검측과표체Pygo2대C6세포중cyclinD1、β-catenin수평적영향,병채용세포면역형광법검측기대C6세포중cyclinD1、β-catenin아세포정위적영향.결과 쌍매절화측서감정결과증실삽입서렬정학,중조체능유효상조Pygo2표체.장중조체전염C6세포상조Pygo2표체후,세포적생장증식피현저촉진,극륭형성현저증다,세포주기진정종G1기지S기전변현저증강；차cyclinD1수평수지증고,아정위무개변,β-catenin수평화아세포정위무명현개변.결론 성공구건료과표체Pygo2적중조체,과표체Pygo2통과증고cyclinD1수평,촉진세포종G1기진입S기,종이촉진대서효질류C6세포증식.
