南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
5期
880-883
,共4页
陈筱婷%杜红延%原少斐%汪森明%李明
陳篠婷%杜紅延%原少斐%汪森明%李明
진소정%두홍연%원소비%왕삼명%리명
肝肠钙粘连蛋白%单克隆抗体%杂交瘤%肿瘤%增值
肝腸鈣粘連蛋白%單剋隆抗體%雜交瘤%腫瘤%增值
간장개점련단백%단극륭항체%잡교류%종류%증치
目的 制备及鉴定肝肠钙粘连蛋白(CDH17)的单克隆抗体,研究其对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用.方法 利用重组CDH17蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗CDH17的单克隆抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA和Western blotting分别对其效价和特异性进行鉴定,以不同浓度的单抗分别作用于HepG2细胞24、48、72和96 h.观察细胞数量和形态的变化,MTT法检测其对HepG2细胞的增值抑制作用.结果 成功建立了2株稳定分泌抗CDH17的单克隆抗体杂交瘤细胞株.两株单抗通过Western blotting实验都能特异性地结合真核细胞内源性的CDH17蛋白.不同浓度的单抗作用后细胞数量明显减少、形态不规则.不同浓度的单抗均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,药物浓度和用药时间之间有交互效应(P<0.05).结论 成功建立了两株效价高、特异性好的抗CDH17蛋白的单克隆抗体,其能抑制HepG2细胞增殖,并呈剂量-时间依赖效应.
目的 製備及鑒定肝腸鈣粘連蛋白(CDH17)的單剋隆抗體,研究其對肝癌細胞繫HepG2的生長抑製作用.方法 利用重組CDH17蛋白為免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾細胞和同繫小鼠的骨髓瘤細胞Sp2/0進行常規融閤,通過間接ELISA的篩選和有限稀釋剋隆化,穫得穩定分泌抗CDH17的單剋隆抗體雜交瘤細胞株,通過ELISA和Western blotting分彆對其效價和特異性進行鑒定,以不同濃度的單抗分彆作用于HepG2細胞24、48、72和96 h.觀察細胞數量和形態的變化,MTT法檢測其對HepG2細胞的增值抑製作用.結果 成功建立瞭2株穩定分泌抗CDH17的單剋隆抗體雜交瘤細胞株.兩株單抗通過Western blotting實驗都能特異性地結閤真覈細胞內源性的CDH17蛋白.不同濃度的單抗作用後細胞數量明顯減少、形態不規則.不同濃度的單抗均能抑製HepG2細胞增殖,呈劑量-時間依賴效應,藥物濃度和用藥時間之間有交互效應(P<0.05).結論 成功建立瞭兩株效價高、特異性好的抗CDH17蛋白的單剋隆抗體,其能抑製HepG2細胞增殖,併呈劑量-時間依賴效應.
목적 제비급감정간장개점련단백(CDH17)적단극륭항체,연구기대간암세포계HepG2적생장억제작용.방법 이용중조CDH17단백위면역원,면역BALB/C소서,취면역소서적비세포화동계소서적골수류세포Sp2/0진행상규융합,통과간접ELISA적사선화유한희석극륭화,획득은정분비항CDH17적단극륭항체잡교류세포주,통과ELISA화Western blotting분별대기효개화특이성진행감정,이불동농도적단항분별작용우HepG2세포24、48、72화96 h.관찰세포수량화형태적변화,MTT법검측기대HepG2세포적증치억제작용.결과 성공건립료2주은정분비항CDH17적단극륭항체잡교류세포주.량주단항통과Western blotting실험도능특이성지결합진핵세포내원성적CDH17단백.불동농도적단항작용후세포수량명현감소、형태불규칙.불동농도적단항균능억제HepG2세포증식,정제량-시간의뢰효응,약물농도화용약시간지간유교호효응(P<0.05).결론 성공건립료량주효개고、특이성호적항CDH17단백적단극륭항체,기능억제HepG2세포증식,병정제량-시간의뢰효응.
