中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2010年
1期
107-110
,共4页
李艳杰%曹江%陈种%王东洋%曾令宇%潘秀英%徐开林
李豔傑%曹江%陳種%王東洋%曾令宇%潘秀英%徐開林
리염걸%조강%진충%왕동양%증령우%반수영%서개림
慢病毒载体%DsRed%EL4细胞%淋巴瘤
慢病毒載體%DsRed%EL4細胞%淋巴瘤
만병독재체%DsRed%EL4세포%림파류
本研究通过慢病毒载体将红色荧光蛋白(DsRed)导入小鼠淋巴瘤EIA细胞,建立稳定高表达DsRed的EL4/DsRed细胞株,为建立携带红色荧光标记的小鼠肿瘤模型奠定基础.构建含新霉素耐药基因(neo)、内部核糖体进入位点序列(IRES)及DsRed的双顺反子自身失活型慢病毒载体.采用脂质体转染法将慢病毒三质粒包装系统共转染人胚肾细胞系293FT包装细胞,收集病毒上清,感染EL4细胞;利用G418的药物选择特性筛选感染细胞获得稳定表达DsRed的EL4细胞株,并扩大培养.结果表明:成功构建慢病毒表达质粒pXZ208-neo-IRES-DsRed,包装的重组慢病毒滴度可达106U/ml.病毒感染EL4细胞,经终浓度为600μg/ml的G418成功筛选出稳定携带DsRexi的EL4/DsRed细胞株;荧光显微镜观察及流式细胞仪检测证实该细胞株长期稳定高表达DsRed.结论:通过表达DsRed的慢病毒载体感染EL4细胞,获得了稳定高表达DsRed的EL4/DsRed细胞株.
本研究通過慢病毒載體將紅色熒光蛋白(DsRed)導入小鼠淋巴瘤EIA細胞,建立穩定高錶達DsRed的EL4/DsRed細胞株,為建立攜帶紅色熒光標記的小鼠腫瘤模型奠定基礎.構建含新黴素耐藥基因(neo)、內部覈糖體進入位點序列(IRES)及DsRed的雙順反子自身失活型慢病毒載體.採用脂質體轉染法將慢病毒三質粒包裝繫統共轉染人胚腎細胞繫293FT包裝細胞,收集病毒上清,感染EL4細胞;利用G418的藥物選擇特性篩選感染細胞穫得穩定錶達DsRed的EL4細胞株,併擴大培養.結果錶明:成功構建慢病毒錶達質粒pXZ208-neo-IRES-DsRed,包裝的重組慢病毒滴度可達106U/ml.病毒感染EL4細胞,經終濃度為600μg/ml的G418成功篩選齣穩定攜帶DsRexi的EL4/DsRed細胞株;熒光顯微鏡觀察及流式細胞儀檢測證實該細胞株長期穩定高錶達DsRed.結論:通過錶達DsRed的慢病毒載體感染EL4細胞,穫得瞭穩定高錶達DsRed的EL4/DsRed細胞株.
본연구통과만병독재체장홍색형광단백(DsRed)도입소서림파류EIA세포,건립은정고표체DsRed적EL4/DsRed세포주,위건립휴대홍색형광표기적소서종류모형전정기출.구건함신매소내약기인(neo)、내부핵당체진입위점서렬(IRES)급DsRed적쌍순반자자신실활형만병독재체.채용지질체전염법장만병독삼질립포장계통공전염인배신세포계293FT포장세포,수집병독상청,감염EL4세포;이용G418적약물선택특성사선감염세포획득은정표체DsRed적EL4세포주,병확대배양.결과표명:성공구건만병독표체질립pXZ208-neo-IRES-DsRed,포장적중조만병독적도가체106U/ml.병독감염EL4세포,경종농도위600μg/ml적G418성공사선출은정휴대DsRexi적EL4/DsRed세포주;형광현미경관찰급류식세포의검측증실해세포주장기은정고표체DsRed.결론:통과표체DsRed적만병독재체감염EL4세포,획득료은정고표체DsRed적EL4/DsRed세포주.
