中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2010年
24期
4421-4424
,共4页
黑皮质素受体3%犬%pGEX-4T-1%诱导表达%质粒构建
黑皮質素受體3%犬%pGEX-4T-1%誘導錶達%質粒構建
흑피질소수체3%견%pGEX-4T-1%유도표체%질립구건
背景:近年黑皮质素受体家族在体内能量平衡中的作用越来越受到重视.黑皮质素受体3基因突变是引起体质量增加的重要因素之一,但是目前对黑皮质素受体3的深入研究很少,且未见在蛋白水平上检测其表达的单克隆抗体.目的:构建犬黑皮质素受体3基因编码区的原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达.方法:以Beagle犬基因组DNA为模板,设计特异性引物,经PCR技术扩增目的片段后,克隆到pMD18-T载体上,双酶切鉴定以后将目的基因亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E.coli DH5α,筛选阳性克隆,DNA测序检测插入序列的正确性.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R转化到E.coli BL21内,经IPTG诱导后,利用Western blot检测犬黑皮质素受体3融合蛋白的表达.结果及结论:成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC3R,经DNA测序证实插入序列与Genebank上公布的序列一致.此重组体经诱导后能在E. coli BL21内表达犬黑皮质素受体3融合蛋白,为进一步获取犬黑皮质素受体3的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究大黑皮质素受体3蛋白的结构和生理功能提供帮助.
揹景:近年黑皮質素受體傢族在體內能量平衡中的作用越來越受到重視.黑皮質素受體3基因突變是引起體質量增加的重要因素之一,但是目前對黑皮質素受體3的深入研究很少,且未見在蛋白水平上檢測其錶達的單剋隆抗體.目的:構建犬黑皮質素受體3基因編碼區的原覈錶達載體併在大腸桿菌中誘導錶達.方法:以Beagle犬基因組DNA為模闆,設計特異性引物,經PCR技術擴增目的片段後,剋隆到pMD18-T載體上,雙酶切鑒定以後將目的基因亞剋隆至原覈錶達載體pGEX-4T-1上,轉化到E.coli DH5α,篩選暘性剋隆,DNA測序檢測插入序列的正確性.將測序正確的重組錶達質粒pGEX-4T-1-cMC3R轉化到E.coli BL21內,經IPTG誘導後,利用Western blot檢測犬黑皮質素受體3融閤蛋白的錶達.結果及結論:成功構建重組錶達質粒pGEX-4T-1-cMC3R,經DNA測序證實插入序列與Genebank上公佈的序列一緻.此重組體經誘導後能在E. coli BL21內錶達犬黑皮質素受體3融閤蛋白,為進一步穫取犬黑皮質素受體3的單剋隆抗體奠定物質基礎,也為研究大黑皮質素受體3蛋白的結構和生理功能提供幫助.
배경:근년흑피질소수체가족재체내능량평형중적작용월래월수도중시.흑피질소수체3기인돌변시인기체질량증가적중요인소지일,단시목전대흑피질소수체3적심입연구흔소,차미견재단백수평상검측기표체적단극륭항체.목적:구건견흑피질소수체3기인편마구적원핵표체재체병재대장간균중유도표체.방법:이Beagle견기인조DNA위모판,설계특이성인물,경PCR기술확증목적편단후,극륭도pMD18-T재체상,쌍매절감정이후장목적기인아극륭지원핵표체재체pGEX-4T-1상,전화도E.coli DH5α,사선양성극륭,DNA측서검측삽입서렬적정학성.장측서정학적중조표체질립pGEX-4T-1-cMC3R전화도E.coli BL21내,경IPTG유도후,이용Western blot검측견흑피질소수체3융합단백적표체.결과급결론:성공구건중조표체질립pGEX-4T-1-cMC3R,경DNA측서증실삽입서렬여Genebank상공포적서렬일치.차중조체경유도후능재E. coli BL21내표체견흑피질소수체3융합단백,위진일보획취견흑피질소수체3적단극륭항체전정물질기출,야위연구대흑피질소수체3단백적결구화생리공능제공방조.
