中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2011年
16期
146-150
,共5页
朱伟伟%陈远良%陈芳%高剑峰
硃偉偉%陳遠良%陳芳%高劍峰
주위위%진원량%진방%고검봉
ClpP%植物表达载体%栽体构建
ClpP%植物錶達載體%栽體構建
ClpP%식물표체재체%재체구건
为了获得黄瓜中ClpP基因的cDNA全序列,研究其与黄瓜芽黄突变现象的关系,采用TRNzol法提取芽黄突变的黄瓜叶片总RNA,并以其为模板反转录合成cDNA第一链.根据NCBI预测的黄瓜ClpP基因序列设计并合成1对特异引物,通过PCR扩增得到目的条带后测序,并构建植物表达载体;成功获得黄瓜中ClpP基因的cDNA全序列,并提交到NCBI.该基因编码区全长495 bp,共编码氨基酸158个.预测其理论等电点为5.22,理论蛋白质分子量为41.00356 KDa,编码的蛋白包含S14 ClpP2保守结构域,无信号肽.通过与其他植物C1p蛋白酶的氨基酸序列比对发现与毛茛属植物的Clp蛋白酶同源性较高.并成功构建了以CaMV35S为启动子的植物表达载体pBI121-ClpP.黄瓜中ClpP基因的cDNA全序列的获得说明该基因在黄瓜中确实存在,这是首次克隆得到了黄瓜中的ClpP基因的cDNA全序列.
為瞭穫得黃瓜中ClpP基因的cDNA全序列,研究其與黃瓜芽黃突變現象的關繫,採用TRNzol法提取芽黃突變的黃瓜葉片總RNA,併以其為模闆反轉錄閤成cDNA第一鏈.根據NCBI預測的黃瓜ClpP基因序列設計併閤成1對特異引物,通過PCR擴增得到目的條帶後測序,併構建植物錶達載體;成功穫得黃瓜中ClpP基因的cDNA全序列,併提交到NCBI.該基因編碼區全長495 bp,共編碼氨基痠158箇.預測其理論等電點為5.22,理論蛋白質分子量為41.00356 KDa,編碼的蛋白包含S14 ClpP2保守結構域,無信號肽.通過與其他植物C1p蛋白酶的氨基痠序列比對髮現與毛茛屬植物的Clp蛋白酶同源性較高.併成功構建瞭以CaMV35S為啟動子的植物錶達載體pBI121-ClpP.黃瓜中ClpP基因的cDNA全序列的穫得說明該基因在黃瓜中確實存在,這是首次剋隆得到瞭黃瓜中的ClpP基因的cDNA全序列.
위료획득황과중ClpP기인적cDNA전서렬,연구기여황과아황돌변현상적관계,채용TRNzol법제취아황돌변적황과협편총RNA,병이기위모판반전록합성cDNA제일련.근거NCBI예측적황과ClpP기인서렬설계병합성1대특이인물,통과PCR확증득도목적조대후측서,병구건식물표체재체;성공획득황과중ClpP기인적cDNA전서렬,병제교도NCBI.해기인편마구전장495 bp,공편마안기산158개.예측기이론등전점위5.22,이론단백질분자량위41.00356 KDa,편마적단백포함S14 ClpP2보수결구역,무신호태.통과여기타식물C1p단백매적안기산서렬비대발현여모간속식물적Clp단백매동원성교고.병성공구건료이CaMV35S위계동자적식물표체재체pBI121-ClpP.황과중ClpP기인적cDNA전서렬적획득설명해기인재황과중학실존재,저시수차극륭득도료황과중적ClpP기인적cDNA전서렬.
