中华口腔医学杂志
中華口腔醫學雜誌
중화구강의학잡지
Chinese Journal of Stomatology
2012年
8期
495-500
,共6页
赵智亮%张纲%李焰%谭颖徽
趙智亮%張綱%李燄%譚穎徽
조지량%장강%리염%담영휘
受体活性修饰蛋白1%降钙素受体样蛋白%降钙素基因相关肽%过表达
受體活性脩飾蛋白1%降鈣素受體樣蛋白%降鈣素基因相關肽%過錶達
수체활성수식단백1%강개소수체양단백%강개소기인상관태%과표체
Receptor activity-modifying protein 1%Calcitonin receptor-like protein%Calcitonin gene-related peptide%Overexpression
目的 探讨受体活性修饰蛋白1( receptor activity modifying protein 1,RAMP-1)过表达对降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)促进MG-63细胞增殖作用的影响,以期阐明神经多肽系统在口腔颌面部创伤修复中的机制.方法 传代培养MG-63细胞并按完全随机法分为3组:RAMP-1过表达组、空载体组、空白对照组.构建人RAMP-1真核表达载体并稳定转染至MG-63细胞中.实时聚合酶链反应、蛋白质印迹法和免疫荧光法分别检测降钙素受体样受体( calcitonin receptor-like receptor,CRLR)在细胞中的表达及在膜上的分布；在0、24、48、72、96 h时使用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)分别检测3组细胞增殖情况；分别在0、8、16、24 h时使用流式细胞仪收集并分析细胞周期.对蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应结果进行单因素方差分析和多重比较检验,对细胞增殖和细胞S期百分率的结果采用双因素方差分析并对处理因素进行多重比较检验.结果 RAMP-1过表达组MG-63细胞的CRLR蛋白及mRNA表达水平明显高于其他两组(P＜0.05)；RAMP-1过表达组在24、48、72及96 h时的A值分别为0.628±0.175、0.896±0.592、1.055±0.004、1.179±0.618,均显著高于相同时间点其他两组A值(P＜0.05),在72 h时与空白对照组(0.786±0.048)差距最明显.RAMP-1过表达组在0、8、16及24 h时S期百分率分别为(1.25±0.13)％、(68.79±0.56)％、(64.49±1.59)％、( 57.82±0.75)％,均显著高于其他两组(P＜0.01),在8h时与空白对照组[(41.235±1.773)％]差距最显著.结论 RAMP-1过表达能促进MG-63细胞膜上的CRLR分布,增强CGRP对MG-63细胞的促增殖作用.
目的 探討受體活性脩飾蛋白1( receptor activity modifying protein 1,RAMP-1)過錶達對降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)促進MG-63細胞增殖作用的影響,以期闡明神經多肽繫統在口腔頜麵部創傷脩複中的機製.方法 傳代培養MG-63細胞併按完全隨機法分為3組:RAMP-1過錶達組、空載體組、空白對照組.構建人RAMP-1真覈錶達載體併穩定轉染至MG-63細胞中.實時聚閤酶鏈反應、蛋白質印跡法和免疫熒光法分彆檢測降鈣素受體樣受體( calcitonin receptor-like receptor,CRLR)在細胞中的錶達及在膜上的分佈；在0、24、48、72、96 h時使用細胞計數試劑盒8(cell counting kit-8,CCK-8)分彆檢測3組細胞增殖情況；分彆在0、8、16、24 h時使用流式細胞儀收集併分析細胞週期.對蛋白質印跡法和實時聚閤酶鏈反應結果進行單因素方差分析和多重比較檢驗,對細胞增殖和細胞S期百分率的結果採用雙因素方差分析併對處理因素進行多重比較檢驗.結果 RAMP-1過錶達組MG-63細胞的CRLR蛋白及mRNA錶達水平明顯高于其他兩組(P＜0.05)；RAMP-1過錶達組在24、48、72及96 h時的A值分彆為0.628±0.175、0.896±0.592、1.055±0.004、1.179±0.618,均顯著高于相同時間點其他兩組A值(P＜0.05),在72 h時與空白對照組(0.786±0.048)差距最明顯.RAMP-1過錶達組在0、8、16及24 h時S期百分率分彆為(1.25±0.13)％、(68.79±0.56)％、(64.49±1.59)％、( 57.82±0.75)％,均顯著高于其他兩組(P＜0.01),在8h時與空白對照組[(41.235±1.773)％]差距最顯著.結論 RAMP-1過錶達能促進MG-63細胞膜上的CRLR分佈,增彊CGRP對MG-63細胞的促增殖作用.
목적 탐토수체활성수식단백1( receptor activity modifying protein 1,RAMP-1)과표체대강개소기인상관태(calcitonin gene-related peptide,CGRP)촉진MG-63세포증식작용적영향,이기천명신경다태계통재구강합면부창상수복중적궤제.방법 전대배양MG-63세포병안완전수궤법분위3조:RAMP-1과표체조、공재체조、공백대조조.구건인RAMP-1진핵표체재체병은정전염지MG-63세포중.실시취합매련반응、단백질인적법화면역형광법분별검측강개소수체양수체( calcitonin receptor-like receptor,CRLR)재세포중적표체급재막상적분포；재0、24、48、72、96 h시사용세포계수시제합8(cell counting kit-8,CCK-8)분별검측3조세포증식정황；분별재0、8、16、24 h시사용류식세포의수집병분석세포주기.대단백질인적법화실시취합매련반응결과진행단인소방차분석화다중비교검험,대세포증식화세포S기백분솔적결과채용쌍인소방차분석병대처리인소진행다중비교검험.결과 RAMP-1과표체조MG-63세포적CRLR단백급mRNA표체수평명현고우기타량조(P＜0.05)；RAMP-1과표체조재24、48、72급96 h시적A치분별위0.628±0.175、0.896±0.592、1.055±0.004、1.179±0.618,균현저고우상동시간점기타량조A치(P＜0.05),재72 h시여공백대조조(0.786±0.048)차거최명현.RAMP-1과표체조재0、8、16급24 h시S기백분솔분별위(1.25±0.13)％、(68.79±0.56)％、(64.49±1.59)％、( 57.82±0.75)％,균현저고우기타량조(P＜0.01),재8h시여공백대조조[(41.235±1.773)％]차거최현저.결론 RAMP-1과표체능촉진MG-63세포막상적CRLR분포,증강CGRP대MG-63세포적촉증식작용.
Objective To investigate the influnce of receptor activity modifying protein 1 ( RAMP-1 ) overexpression on enhancing effect of calcitonin gene-related peptide on MG-63 cells proliferation. Methods Cultured MG-63 osteoblasts in exponential phase of growth were randomly divided into three groups:RAMP-1 overexpression group,empty vector control group and negative control group. RAMP-1 eukaryotic expression vector was constructed and stalely transfected into MG-63 cells. Realtime-polymerase chain reaction,Western blotting and immunofluroescence were used respectively to detect the expression of calcitonin receptor-like receptor( CRLR ) in the cells and its distribution on cell membrane.The status of proliferation was detected respectively at 0,24,48,72,96 h by cell counting kit-8( CCK-8 ) and cells were collected to analyze their cycle respectively at 0,8,16,24 h by flow cytometry.Results CRLR protein and mRNA expression levels of MG-63 cells in RAMP-1 overexpression group were significantly higher than the other two groups (P＜0.05).The A value of RAMP-1 overexpression group at 24,48,72,96 h were 0.628 ±0.175,0.896 ±0.592,1.055 ±0.004,1.179 ±0.618,respectively,which were significantly higher than that of the other two groups( P ＜0.05).The difference was most pronounced at 72 h.S-phase fraction of RAMP-1 overexpression group was ( 1.25 ± 0.13 ) ％,( 68.79 ± 0.56 ) ％,( 64.49 ± 1.59 ) ％,( 57.82 ± 0.75 ) ％,respectively,which were significantly higher than the other two groups ( P ＜ 0.05 ). The difference was most pronounced at 8 h.Conclusions RAMP-1 overexpression can promote CRLR distribution on MG-63 cell membrane and enhance CGRP's promotion effect on MG-63 cell proliferation.
