中华血液学杂志
中華血液學雜誌
중화혈액학잡지
Chinese Journal of Hematology
2007年
6期
379-382
,共4页
康睿%曹励之%俞燕%胡婷%王卓%许望琼%谢岷
康睿%曹勵之%俞燕%鬍婷%王卓%許望瓊%謝岷
강예%조려지%유연%호정%왕탁%허망경%사민
基因,WAVE1%抗药性,多药%细胞系,K562/A02%RNA干扰
基因,WAVE1%抗藥性,多藥%細胞繫,K562/A02%RNA榦擾
기인,WAVE1%항약성,다약%세포계,K562/A02%RNA간우
目的 探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)基因在K562/A02白血病细胞多药耐药机制中的作用.方法 将pEFBOS-WAVE1真核表达质粒转染K562细胞构建WAVE1高表达的K562细胞,将WAVE1基因的特异性小片段干扰RNA(WAVE1 siRNA)转染K562/A02细胞构建WAVE1低表达的K562/A02细胞.Western blot和RT-PCR法检测基因转染前后K562/A02细胞及K562细胞WAVE1基因及蛋白的表达;可溶性噻唑盐WST-8染色法检测阿霉素对转染前后细胞的半数抑制浓度(IC50);Hoechest33258染色法检测细胞形态学改变并计算凋亡细胞百分率;RT-PCR检测多药耐药基因mdr1 mRNA表达;Western blot检测Bcl-2表达.结果 ①与K562细胞相比,K562/A02细胞WAVE1 mRNA表达水平增加70%,蛋白表达水平增加63%.②转染WAVE1基因的K562细胞WAVE1过表达,并降低了对阿霉素的药物敏感性,使IC50从转染前的(0.05±0.00)μg/ml,增加到(2.99±0.12)μg/ml,在阿霉素浓度为1、5 μg/ml时,凋亡细胞分别下降30%、35%.③转染WAVE1siRNA的K562/A02细胞WAVE1蛋白表达水平与未转染组相比明显降低,并可增强对阿霉素的药物敏感性,使IC50从转染前的(4.29±0.15)μg/ml下降到(1.85±0.07)μg/ml,阿霉素浓度为1、5 μg/ml时,凋亡细胞分别增加24%、21%.④转染WAVE1的K562细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平均增高,而转染WAVE1 siRNA的K562/A02细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平比转染前明显降低.结论 WAVE1参与了K562/A02细胞多药耐药的形成,其机制可能与调控mdr1和Bcl-2水平有关.
目的 探討WASP傢族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)基因在K562/A02白血病細胞多藥耐藥機製中的作用.方法 將pEFBOS-WAVE1真覈錶達質粒轉染K562細胞構建WAVE1高錶達的K562細胞,將WAVE1基因的特異性小片段榦擾RNA(WAVE1 siRNA)轉染K562/A02細胞構建WAVE1低錶達的K562/A02細胞.Western blot和RT-PCR法檢測基因轉染前後K562/A02細胞及K562細胞WAVE1基因及蛋白的錶達;可溶性噻唑鹽WST-8染色法檢測阿黴素對轉染前後細胞的半數抑製濃度(IC50);Hoechest33258染色法檢測細胞形態學改變併計算凋亡細胞百分率;RT-PCR檢測多藥耐藥基因mdr1 mRNA錶達;Western blot檢測Bcl-2錶達.結果 ①與K562細胞相比,K562/A02細胞WAVE1 mRNA錶達水平增加70%,蛋白錶達水平增加63%.②轉染WAVE1基因的K562細胞WAVE1過錶達,併降低瞭對阿黴素的藥物敏感性,使IC50從轉染前的(0.05±0.00)μg/ml,增加到(2.99±0.12)μg/ml,在阿黴素濃度為1、5 μg/ml時,凋亡細胞分彆下降30%、35%.③轉染WAVE1siRNA的K562/A02細胞WAVE1蛋白錶達水平與未轉染組相比明顯降低,併可增彊對阿黴素的藥物敏感性,使IC50從轉染前的(4.29±0.15)μg/ml下降到(1.85±0.07)μg/ml,阿黴素濃度為1、5 μg/ml時,凋亡細胞分彆增加24%、21%.④轉染WAVE1的K562細胞mdr1基因和Bcl-2蛋白錶達水平均增高,而轉染WAVE1 siRNA的K562/A02細胞mdr1基因和Bcl-2蛋白錶達水平比轉染前明顯降低.結論 WAVE1參與瞭K562/A02細胞多藥耐藥的形成,其機製可能與調控mdr1和Bcl-2水平有關.
목적 탐토WASP가족Verprolin동원단백1(WAVE1)기인재K562/A02백혈병세포다약내약궤제중적작용.방법 장pEFBOS-WAVE1진핵표체질립전염K562세포구건WAVE1고표체적K562세포,장WAVE1기인적특이성소편단간우RNA(WAVE1 siRNA)전염K562/A02세포구건WAVE1저표체적K562/A02세포.Western blot화RT-PCR법검측기인전염전후K562/A02세포급K562세포WAVE1기인급단백적표체;가용성새서염WST-8염색법검측아매소대전염전후세포적반수억제농도(IC50);Hoechest33258염색법검측세포형태학개변병계산조망세포백분솔;RT-PCR검측다약내약기인mdr1 mRNA표체;Western blot검측Bcl-2표체.결과 ①여K562세포상비,K562/A02세포WAVE1 mRNA표체수평증가70%,단백표체수평증가63%.②전염WAVE1기인적K562세포WAVE1과표체,병강저료대아매소적약물민감성,사IC50종전염전적(0.05±0.00)μg/ml,증가도(2.99±0.12)μg/ml,재아매소농도위1、5 μg/ml시,조망세포분별하강30%、35%.③전염WAVE1siRNA적K562/A02세포WAVE1단백표체수평여미전염조상비명현강저,병가증강대아매소적약물민감성,사IC50종전염전적(4.29±0.15)μg/ml하강도(1.85±0.07)μg/ml,아매소농도위1、5 μg/ml시,조망세포분별증가24%、21%.④전염WAVE1적K562세포mdr1기인화Bcl-2단백표체수평균증고,이전염WAVE1 siRNA적K562/A02세포mdr1기인화Bcl-2단백표체수평비전염전명현강저.결론 WAVE1삼여료K562/A02세포다약내약적형성,기궤제가능여조공mdr1화Bcl-2수평유관.
