药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2002年
2期
74-78
,共5页
王艳茹%安琳%李令媛%茹炳根
王豔茹%安琳%李令媛%茹炳根
왕염여%안림%리령원%여병근
三叶因子3%甲醇酵母%信号肽%分泌
三葉因子3%甲醇酵母%信號肽%分泌
삼협인자3%갑순효모%신호태%분비
为了表达具有天然N-末端的人三叶因子3,构建了含两种信号肽序列的毕赤酵母表达载体,其中一种表达载体在分泌信号肽序列a-factor后保留STE13信号肽切割序列,另一种表达载体去除了该序列.将2种表达载体分别转化到毕赤酵母GS115中进行表达.经甲醇诱导后目的蛋白分泌到发酵液上清中,SDS-PAGE和Western印迹证明2种重组蛋白均以二体的形式分泌表达,分子质量约为13ku,都能被TFF3抗体所识别.N-端氨基酸测序证明其中一个重组蛋白具有天然人TFF3的N端,质谱检测分子质量与天然蛋白一致;另一重组蛋白N-端则带有2个未切割完全的信号肽序列CluAla,质谱检测该蛋白中还含有部分切割完全的蛋白.
為瞭錶達具有天然N-末耑的人三葉因子3,構建瞭含兩種信號肽序列的畢赤酵母錶達載體,其中一種錶達載體在分泌信號肽序列a-factor後保留STE13信號肽切割序列,另一種錶達載體去除瞭該序列.將2種錶達載體分彆轉化到畢赤酵母GS115中進行錶達.經甲醇誘導後目的蛋白分泌到髮酵液上清中,SDS-PAGE和Western印跡證明2種重組蛋白均以二體的形式分泌錶達,分子質量約為13ku,都能被TFF3抗體所識彆.N-耑氨基痠測序證明其中一箇重組蛋白具有天然人TFF3的N耑,質譜檢測分子質量與天然蛋白一緻;另一重組蛋白N-耑則帶有2箇未切割完全的信號肽序列CluAla,質譜檢測該蛋白中還含有部分切割完全的蛋白.
위료표체구유천연N-말단적인삼협인자3,구건료함량충신호태서렬적필적효모표체재체,기중일충표체재체재분비신호태서렬a-factor후보류STE13신호태절할서렬,령일충표체재체거제료해서렬.장2충표체재체분별전화도필적효모GS115중진행표체.경갑순유도후목적단백분비도발효액상청중,SDS-PAGE화Western인적증명2충중조단백균이이체적형식분비표체,분자질량약위13ku,도능피TFF3항체소식별.N-단안기산측서증명기중일개중조단백구유천연인TFF3적N단,질보검측분자질량여천연단백일치;령일중조단백N-단칙대유2개미절할완전적신호태서렬CluAla,질보검측해단백중환함유부분절할완전적단백.
