CAJ | 학술논문

将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中,构建N基因克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析.然后亚克隆插入pBAD/Thio TOPO表达载体,经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定,筛选获得N基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了水泡性口炎病毒N基因重组表达载体.经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达N蛋白抗原.SDS-PAGE、Western blotting及间接ELISA试验结果表明,表达蛋白为融合蛋白,质量约63.5 kD,其表达产量约占菌体总蛋白的16%,相当于92mg/L.融合蛋白中含有水泡性口炎病毒群特异性的核蛋白抗原,应用表达的VSV核蛋白抗原建立了酶联免疫吸附试验,通过对186份山羊、豚鼠实验动物人工感染VSV的血清样品和参考血清样品的检测,并与微量血清中和试验进行了比较,结果表明:以表达的VSV核蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验是一种特异性强、敏感性高、快速、简单、安全的检测方法,抗原制备成本低.
장수포성구염병독편마군특이성항원적N기인편단극륭지pMD18-T극륭재체질립중,구건N기인극륭중조질립,진행핵감산서렬분석.연후아극륭삽입pBAD/Thio TOPO표체재체,경PCR한제성내절매분석、측서감정,사선획득N기인정향삽입、유정학독마광적양성극륭,성공구건료수포성구염병독N기인중조표체재체.경L-Arabinose유도표체,가은정、고효지표체N단백항원.SDS-PAGE、Western blotting급간접ELISA시험결과표명,표체단백위융합단백,질량약63.5 kD,기표체산량약점균체총단백적16%,상당우92mg/L.융합단백중함유수포성구염병독군특이성적핵단백항원,응용표체적VSV핵단백항원건립료매련면역흡부시험,통과대186빈산양、돈서실험동물인공감염VSV적혈청양품화삼고혈청양품적검측,병여미량혈청중화시험진행료비교,결과표명:이표체적VSV핵단백위포피항원적매련면역흡부시험시일충특이성강、민감성고、쾌속、간단、안전적검측방법,항원제비성본저.