CAJ | 학술논문

目的在克隆P21相关激酶6(PAK6)全长cDNA的基础上,进一步克隆PAK6-N端基因并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因产物并进行多克隆抗体制备,为研究PAK6与疾病的关系奠定基础.同时研究PAK6在前列腺癌中的表达.方法根据人全长PAK6 cDNA序列,设计PCR引物,以人前列腺癌cDNA文库为模板利用PCR技术克隆PAK6全长cDNA.在此基础上,以PAK6全长cDNA为模板克隆PAK6-N端基因,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中,经EcoRI/XhoI双酶切鉴定后,进行DAN序列测定.GST-PAK6-N融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达.利用G1utothione亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-PAK6-N融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并用纯化的抗PAK6多克隆抗体在3例前列腺癌病人标本中进行了免疫组化表达的初步研究.结果成功克隆了PAK6全长cDNA和PAK6-N端基因片断,在E.coli中表达了PAK6-NT,纯化了GST-PAK6-N融合蛋白,并制备了PAK6特异性抗体.免疫组织化学研究表明:3例前列腺癌患者石蜡包埋病理组织切片免疫组化染色全部表现为间质阳性,PAK6在前列腺癌间质中呈现表达,而前列腺癌细胞则不染色.结论首次克隆了PAK6全长cDNA和PAK6-N端基因片断并成功制备了PAK6特异性抗体,为深入探讨PAK6在前列腺癌中的作用奠定了基础.初步揭示PAK6在前列腺癌的表达
목적 재극륭P21상관격매6(PAK6)전장cDNA적기출상,진일보극륭PAK6-N단기인병사기재대장간균중고효표체,순화기인산물병진행다극륭항체제비,위연구PAK6여질병적관계전정기출.동시연구PAK6재전렬선암중적표체.방법 근거인전장PAK6 cDNA서렬,설계PCR인물,이인전렬선암cDNA문고위모판이용PCR기술극륭PAK6전장cDNA.재차기출상,이PAK6전장cDNA위모판극륭PAK6-N단기인,장확증산물극륭지대장간균표체재체pGEX-4T-1중,경EcoRI/XhoI쌍매절감정후,진행DAN서렬측정.GST-PAK6-N융합단백재류대반유당감(IPTG)유도하재대장간균BL21중득도표체.이용G1utothione친화층석순화융합단백,용순화적GST-PAK6-N융합단백면역가토제비다극륭항체,병용순화적항PAK6다극륭항체재3례전렬선암병인표본중진행료면역조화표체적초보연구.결과 성공극륭료PAK6전장cDNA화PAK6-N단기인편단,재E.coli중표체료PAK6-NT,순화료GST-PAK6-N융합단백,병제비료PAK6특이성항체.면역조직화학연구표명:3례전렬선암환자석사포매병리조직절편면역조화염색전부표현위간질양성,PAK6재전렬선암간질중정현표체,이전렬선암세포칙불염색.결론 수차극륭료PAK6전장cDNA화PAK6-N단기인편단병성공제비료PAK6특이성항체,위심입탐토PAK6재전렬선암중적작용전정료기출.초보게시PAK6재전렬선암적표체