科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2007年
20期
2379-2385
,共7页
涂礼莉%张献龙%刘迪秋%金双侠%曹景林%朱龙付%邓锋林%谭家福%张存斌
塗禮莉%張獻龍%劉迪鞦%金雙俠%曹景林%硃龍付%鄧鋒林%譚傢福%張存斌
도례리%장헌룡%류적추%금쌍협%조경림%주룡부%산봉림%담가복%장존빈
棉花%纤维发育%持家基因%内对照%实时定量PCR(qRT-RCR)%体细胞胚胎发生
棉花%纖維髮育%持傢基因%內對照%實時定量PCR(qRT-RCR)%體細胞胚胎髮生
면화%섬유발육%지가기인%내대조%실시정량PCR(qRT-RCR)%체세포배태발생
实时定量PCR技术(qRT-PCR)能够快速地对多个样品进行基因表达分析, 因此已成为芯片和微点阵数据验证的常用手段. 为了得到更精确的数据, 通常需要一个和多个内对照基因来平衡化qRT- PCR数据. 目前一般选择持家基因(housekeeping gene)作为内对照, 但很多持家基因的表达水平随着环境的改变而改变. 在棉花纤维发育和体细胞胚发生机制研究过程中已经产生大量芯片和微点阵数据, 但目前在采用实时定量PCR验证这些数据时都只用了一个持家基因来平衡化数据. 为了验证其可靠性, 本研究根据常用的持家基因(18S rRNA, Histone3, UBQ7, Actin, Cyclophilin, Gbpolyubiquitin-1和Gbpolyubi- quitin-2)设计了7对引物, 用相对的绝对定量法验证了在棉花不同组织和不同发育阶段(21个样品)表达水平的稳定性, 发现在纤维发育的后期(17 DPA (day post anthesis)以后), 这些基因的表达都下调, 而纤维发育后期特异表达基因AGP的表达从15 DPA开始到27 DPA一直都呈上升趋势. 因此对于纤维系列特别是纤维发育后期基因的qRT-PCR更好的选择是相对的绝对定量. 而对于非纤维系列, 这些持家基因的表达水平相对纤维系列变化幅度较小, 但为了得到更精确的表达数据, 应该同时用Histone3, UBQ7和Gbpolyubiquitin-1一起来平衡化qRT-PCR数据.
實時定量PCR技術(qRT-PCR)能夠快速地對多箇樣品進行基因錶達分析, 因此已成為芯片和微點陣數據驗證的常用手段. 為瞭得到更精確的數據, 通常需要一箇和多箇內對照基因來平衡化qRT- PCR數據. 目前一般選擇持傢基因(housekeeping gene)作為內對照, 但很多持傢基因的錶達水平隨著環境的改變而改變. 在棉花纖維髮育和體細胞胚髮生機製研究過程中已經產生大量芯片和微點陣數據, 但目前在採用實時定量PCR驗證這些數據時都隻用瞭一箇持傢基因來平衡化數據. 為瞭驗證其可靠性, 本研究根據常用的持傢基因(18S rRNA, Histone3, UBQ7, Actin, Cyclophilin, Gbpolyubiquitin-1和Gbpolyubi- quitin-2)設計瞭7對引物, 用相對的絕對定量法驗證瞭在棉花不同組織和不同髮育階段(21箇樣品)錶達水平的穩定性, 髮現在纖維髮育的後期(17 DPA (day post anthesis)以後), 這些基因的錶達都下調, 而纖維髮育後期特異錶達基因AGP的錶達從15 DPA開始到27 DPA一直都呈上升趨勢. 因此對于纖維繫列特彆是纖維髮育後期基因的qRT-PCR更好的選擇是相對的絕對定量. 而對于非纖維繫列, 這些持傢基因的錶達水平相對纖維繫列變化幅度較小, 但為瞭得到更精確的錶達數據, 應該同時用Histone3, UBQ7和Gbpolyubiquitin-1一起來平衡化qRT-PCR數據.
실시정량PCR기술(qRT-PCR)능구쾌속지대다개양품진행기인표체분석, 인차이성위심편화미점진수거험증적상용수단. 위료득도경정학적수거, 통상수요일개화다개내대조기인래평형화qRT- PCR수거. 목전일반선택지가기인(housekeeping gene)작위내대조, 단흔다지가기인적표체수평수착배경적개변이개변. 재면화섬유발육화체세포배발생궤제연구과정중이경산생대량심편화미점진수거, 단목전재채용실시정량PCR험증저사수거시도지용료일개지가기인래평형화수거. 위료험증기가고성, 본연구근거상용적지가기인(18S rRNA, Histone3, UBQ7, Actin, Cyclophilin, Gbpolyubiquitin-1화Gbpolyubi- quitin-2)설계료7대인물, 용상대적절대정량법험증료재면화불동조직화불동발육계단(21개양품)표체수평적은정성, 발현재섬유발육적후기(17 DPA (day post anthesis)이후), 저사기인적표체도하조, 이섬유발육후기특이표체기인AGP적표체종15 DPA개시도27 DPA일직도정상승추세. 인차대우섬유계렬특별시섬유발육후기기인적qRT-PCR경호적선택시상대적절대정량. 이대우비섬유계렬, 저사지가기인적표체수평상대섬유계렬변화폭도교소, 단위료득도경정학적표체수거, 응해동시용Histone3, UBQ7화Gbpolyubiquitin-1일기래평형화qRT-PCR수거.
