安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2012年
10期
1165-1168
,共4页
慢病毒载体%RNA干扰%FGL2基因
慢病毒載體%RNA榦擾%FGL2基因
만병독재체%RNA간우%FGL2기인
目的 拟构建人纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)凝血酶原酶基因RNA干扰慢病毒载体,为调控人FGL2凝血酶原酶表达水平提供有利的工具.方法 根据人FGL2凝血酶原酶基因的mRNA序列选择4条靶序列,设计合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切后的pGCSIL-GFP 载体连接产生FGL2慢病毒载体,采用PCR及测序鉴定,应用Western blot 技术外源性筛选干扰效率高的有效靶序列.用慢病毒包装系统pGCSIL-GFP、pHelper1.0和pHelper2.0共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以系列稀释法测定病毒滴度.结果 PCR扩增和测序结果显示,人FGL2凝血酶原酶核苷酸链序列插入正确,外源性筛选确定一条干扰效率高的有效靶序列.利用筛选确定的有效靶序列,包装产生慢病毒,其浓缩病毒悬液的滴度为1×109 TU/ml.结论 证实实验成功构建了FGL2基因RNA干扰慢病毒载体.
目的 擬構建人纖維蛋白原樣蛋白2(FGL2)凝血酶原酶基因RNA榦擾慢病毒載體,為調控人FGL2凝血酶原酶錶達水平提供有利的工具.方法 根據人FGL2凝血酶原酶基因的mRNA序列選擇4條靶序列,設計閤成靶序列的Oligo DNA,退火形成雙鏈DNA,與經AgeⅠ和EcoRⅠ雙酶切後的pGCSIL-GFP 載體連接產生FGL2慢病毒載體,採用PCR及測序鑒定,應用Western blot 技術外源性篩選榦擾效率高的有效靶序列.用慢病毒包裝繫統pGCSIL-GFP、pHelper1.0和pHelper2.0共轉染包裝293T細胞,包裝產生慢病毒,以繫列稀釋法測定病毒滴度.結果 PCR擴增和測序結果顯示,人FGL2凝血酶原酶覈苷痠鏈序列插入正確,外源性篩選確定一條榦擾效率高的有效靶序列.利用篩選確定的有效靶序列,包裝產生慢病毒,其濃縮病毒懸液的滴度為1×109 TU/ml.結論 證實實驗成功構建瞭FGL2基因RNA榦擾慢病毒載體.
목적 의구건인섬유단백원양단백2(FGL2)응혈매원매기인RNA간우만병독재체,위조공인FGL2응혈매원매표체수평제공유리적공구.방법 근거인FGL2응혈매원매기인적mRNA서렬선택4조파서렬,설계합성파서렬적Oligo DNA,퇴화형성쌍련DNA,여경AgeⅠ화EcoRⅠ쌍매절후적pGCSIL-GFP 재체련접산생FGL2만병독재체,채용PCR급측서감정,응용Western blot 기술외원성사선간우효솔고적유효파서렬.용만병독포장계통pGCSIL-GFP、pHelper1.0화pHelper2.0공전염포장293T세포,포장산생만병독,이계렬희석법측정병독적도.결과 PCR확증화측서결과현시,인FGL2응혈매원매핵감산련서렬삽입정학,외원성사선학정일조간우효솔고적유효파서렬.이용사선학정적유효파서렬,포장산생만병독,기농축병독현액적적도위1×109 TU/ml.결론 증실실험성공구건료FGL2기인RNA간우만병독재체.
