中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2001年
6期
604-607
,共4页
芦兴武%殷际义%李永海%崔莲仙
蘆興武%慇際義%李永海%崔蓮仙
호흥무%은제의%리영해%최련선
差异显示%B淋巴细胞%原核基因表达
差異顯示%B淋巴細胞%原覈基因錶達
차이현시%B림파세포%원핵기인표체
目的克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达. 方法采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析,差异显示的片段经过Northern杂交验证后,作为探针进行人活化B细胞cDNA文库的筛选.将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌BL-21,以IPTG诱导表达融合蛋白. 结果以在活化B细胞高表达的EST32为探针,经3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为1?514bp的cDNA克隆(命名为BC-1514).重组的BC-1514蛋白可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,其表达量约占细菌总蛋白量的14.3%左右.BC-1514 cDNA的GenBank的登录号为AF304442. 结论获得了1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E.coli BL-21中得到了有效表达.
目的剋隆與B細胞活化相關的新基因及其原覈錶達. 方法採用差異顯示反轉錄PCR(DDRT-PCR)技術對人扁桃體活化和靜止B細胞mRNA的差異錶達進行分析,差異顯示的片段經過Northern雜交驗證後,作為探針進行人活化B細胞cDNA文庫的篩選.將所穫得的暘性剋隆的編碼區經PCR擴增後剋隆到原覈錶達載體pGEX-5X-1中,重組質粒經酶切、測序鑒定後轉化大腸桿菌BL-21,以IPTG誘導錶達融閤蛋白. 結果以在活化B細胞高錶達的EST32為探針,經3輪篩選人活化B細胞文庫穫得一箇新的全長為1?514bp的cDNA剋隆(命名為BC-1514).重組的BC-1514蛋白可在E.coli中以融閤蛋白的形式有效錶達,其錶達量約佔細菌總蛋白量的14.3%左右.BC-1514 cDNA的GenBank的登錄號為AF304442. 結論穫得瞭1條新的與B細胞活化相關的cDNA剋隆併在E.coli BL-21中得到瞭有效錶達.
목적극륭여B세포활화상관적신기인급기원핵표체. 방법채용차이현시반전록PCR(DDRT-PCR)기술대인편도체활화화정지B세포mRNA적차이표체진행분석,차이현시적편단경과Northern잡교험증후,작위탐침진행인활화B세포cDNA문고적사선.장소획득적양성극륭적편마구경PCR확증후극륭도원핵표체재체pGEX-5X-1중,중조질립경매절、측서감정후전화대장간균BL-21,이IPTG유도표체융합단백. 결과이재활화B세포고표체적EST32위탐침,경3륜사선인활화B세포문고획득일개신적전장위1?514bp적cDNA극륭(명명위BC-1514).중조적BC-1514단백가재E.coli중이융합단백적형식유효표체,기표체량약점세균총단백량적14.3%좌우.BC-1514 cDNA적GenBank적등록호위AF304442. 결론획득료1조신적여B세포활화상관적cDNA극륭병재E.coli BL-21중득도료유효표체.
