中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2002年
1期
69-73
,共5页
高晨%侯星生%张福萍%周伟%袁育康%董小平
高晨%侯星生%張福萍%週偉%袁育康%董小平
고신%후성생%장복평%주위%원육강%동소평
氯霉素乙酰转移酶%抗体,病毒%酶联免疫吸附测定%人乳头状瘤病毒
氯黴素乙酰轉移酶%抗體,病毒%酶聯免疫吸附測定%人乳頭狀瘤病毒
록매소을선전이매%항체,병독%매련면역흡부측정%인유두상류병독
目的建立氯霉素乙酰基转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法.方法从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列,插入到原核表达质粒pGEX-2T中,在大肠埃希菌DH5α中诱导表达;以纯化的融合蛋白GST-CAT为抗原免疫实验用兔,得到的CAT抗血清进行生物素标记,并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法.构建不同YY1结合位点突变的HPV16 LCR CAT报道质粒,体外瞬时转染真核细胞,提取胞质蛋白,以建立的方法进行CAT表达检测.结果 SDS-PAGE显示表达的GST-CAT融合蛋白相对分子质量约为54 000;制备的CAT抗血清可有效地识别原核及哺乳动物细胞表达的CAT蛋白;在不同启动子及调节序列的控制下,利用建立的CAT检测技术证明在瞬时转染的细胞中可诱导2～8倍的CAT表达增强.结论建立的双抗体夹心ELISA方法可敏感地反映上游序列的启动子活性,以及启动子调节序列变化对启动子活性的影响,使CAT作为报道基因的研究更为简单化.
目的建立氯黴素乙酰基轉移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)雙抗體夾心ELISA的實驗室檢測方法.方法從質粒pBLCAT6經PCR擴增CAT基因序列,插入到原覈錶達質粒pGEX-2T中,在大腸埃希菌DH5α中誘導錶達;以純化的融閤蛋白GST-CAT為抗原免疫實驗用兔,得到的CAT抗血清進行生物素標記,併在此基礎上利用生物素鏈和親和素放大繫統建立雙抗體夾心ELISA法.構建不同YY1結閤位點突變的HPV16 LCR CAT報道質粒,體外瞬時轉染真覈細胞,提取胞質蛋白,以建立的方法進行CAT錶達檢測.結果 SDS-PAGE顯示錶達的GST-CAT融閤蛋白相對分子質量約為54 000;製備的CAT抗血清可有效地識彆原覈及哺乳動物細胞錶達的CAT蛋白;在不同啟動子及調節序列的控製下,利用建立的CAT檢測技術證明在瞬時轉染的細胞中可誘導2～8倍的CAT錶達增彊.結論建立的雙抗體夾心ELISA方法可敏感地反映上遊序列的啟動子活性,以及啟動子調節序列變化對啟動子活性的影響,使CAT作為報道基因的研究更為簡單化.
목적건립록매소을선기전이매(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)쌍항체협심ELISA적실험실검측방법.방법종질립pBLCAT6경PCR확증CAT기인서렬,삽입도원핵표체질립pGEX-2T중,재대장애희균DH5α중유도표체;이순화적융합단백GST-CAT위항원면역실험용토,득도적CAT항혈청진행생물소표기,병재차기출상이용생물소련화친화소방대계통건립쌍항체협심ELISA법.구건불동YY1결합위점돌변적HPV16 LCR CAT보도질립,체외순시전염진핵세포,제취포질단백,이건립적방법진행CAT표체검측.결과 SDS-PAGE현시표체적GST-CAT융합단백상대분자질량약위54 000;제비적CAT항혈청가유효지식별원핵급포유동물세포표체적CAT단백;재불동계동자급조절서렬적공제하,이용건립적CAT검측기술증명재순시전염적세포중가유도2～8배적CAT표체증강.결론건립적쌍항체협심ELISA방법가민감지반영상유서렬적계동자활성,이급계동자조절서렬변화대계동자활성적영향,사CAT작위보도기인적연구경위간단화.
